3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn
3.2. TẠO DÒNG TẾ BÀO HUYỀN PHÙ CÂYHOA CÚC NHẬT CN01
Nhằm mục tiêu chủ động nhân nhanh sinh khối tế bào, nhu cầu nuôi cấy mô sẹo cũng nhƣ dịch huyền phù cây hoa Cúc nhật CN01 vô cùng cấp thiết. Mặt khác, mô sẹo thƣờng có biểu hiện già hóa nhanh khi nuôi cấy trong môi trƣờng thạch trong thời gian dài. Biểu hiện của già hóa là tế bào chuyển màu vàng nhạt, sang màu vàng đậm, tiếp theo là nâu hóa rồi chết. Hơn nữa, tốc độ tăng sinh khối trên môi trƣờng đặc chậm. Để khắc phục tình trạng này, ta tiến hành tạo dòng tế bào huyền phù cây hoa Cúc nhật CN01.
Sau khi tạo đƣợc mô sẹo, tôi tiến hành lựa chọn những khối mô sẹo có sức sinh trƣởng phát triển nhanh, kích thƣớc tế bào to, có màu xanh lá, hơi xốp để tiến hành sử dụng làm nguyên liệu cho thí nghiệm tạo dịch huyền phù tế bào này.
Ở giai đoạn này tôi sử dụng môi trƣờng có bổ sung chất điều hoà sinh trƣởng BAP, BAP kết hợp với nƣớc dừa với các nồng độ khác nhau. Tiến hành thí nghiệm trên môi trƣờng lỏng, lắc nhằm mục đích tạo ra dòng tế bào
chất dinh dƣỡng dễ dàng, vừa có sự trao đổi khí tốt hơn nên trọng lƣợng tế bào tăng rất nhanh, đồng thời đƣợc tách thành những cụm tế bào và tế bào rời trong dung dịch nuôi cấy. Đây chính là dạng khởi đầu của dịch huyền phù tế bào (hình 3.5 - A). Thời gian nuôi cấy và theo dõi trên môi trƣờng lỏng lắc 2 - 3 tuần. Qua theo dõi nhận thấy: sau 2 tuần nuôi cấy, các tế bào đƣợc nuôi trên môi trƣờng có bổ sung BAP ở nồng độ 0,7 mg/l có sự nhân lên đáng kể, sinh khối mô sẹo tăng và có màu xanh (hình 3.5 - C), gồm các tế bào đơn hoặc các cụm tế bào nhỏ tách rời, tƣơng đối đồng đều về mặt kích thƣớc và hình dạng. Nhƣ vậy, môi trƣờng thích hợp để tạo dòng mô sẹo cây hoa Cúc nhật CN01 là BAP 0,7 mg/l.
Ở các môi trƣờng BAP (0,5-0,7-1 mg/l) kết hợp với nƣớc dừa (10%) khối tế bào cũng có sự phát triển, nhƣng chỉ sau vài ngày các tế bào đã bƣớc vào giai đoạn già hóa, màu sắc chuyển nâu dần (hình 3.5-B). Điều này cũng xảy ra với các tế bào đƣợc nuôi trong môi trƣờng dinh dƣỡng có bổ sung BAP nồng độ 0,7 mg khi thời gian nuôi cấy bƣớc sang tuần thứ 3 (hình 3.5-D).
A.Tế bào khi bắt đầu nuôi cấy B. Tế bào sau 2 tuần nuôi cấy trong môi trƣờng BAP 0,7 + nƣớc dừa 10%
C. Tế bào sau 2 tuần nuôi cấy trong môi trƣờng BAP 0,7
D. Tế bào sau 3 tuần nuôi cấy trong môi trƣờng BAP 0,7
Hình 3.5. Một số hình ảnh trong quá trình nuôi cấy huyền phù tế bào cây hoa Cúc nhật CN01