2.2.3.1. Phương pháp đánh giá khả năng quét gốc tự do DPPH :
Mẫu nghiên cứu : cao chiết ethanol 70% và các phân đoạn tương ứng.
Tiến hành: theo tài liệu [14], [15], có chỉnh sửa nhỏ để phù hợp với điều kiện thực tế.
Pha dung dịch DPPH có nồng độ 150 µM trong methanol. Dung dịch này không bền với ánh sáng, chỉ pha trước khi dùng.
Pha các dung dịch thử trong methanol có nồng độ thích hợp. Ống thử : 25 µL dung dịch thử + 975 µL dung dịch DPPH Ống chứng : 25 µL methanol + 975 µL dung dịch DPPH
Lắc đều các ống trong 15 giây, để ổn định ở nhiệt độ phòng trong 30 phút và đo quang ở bước sóng 515 nm.
Hoạt tính chống oxy hóa (I) được tính theo công thức: I% = (A chứng – A thử) / A chứng x 100
Trong đó:
A: mật độ quang.
Thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần. Quercetin được sử dụng làm chứng dương.
2.2.3.2. Phương pháp đánh giá khả năng quét gốc tự do ABTS:
Mẫu nghiên cứu : cao chiết ethanol 70% và các phân đoạn tương ứng.
Khả năng quét gốc tự do ABTS•+ được tiến hành theo tài liệu [40],[44].
Dung dịch gốc ABTS•+ được pha từ 7 mM ABTS•+ và 2.45 mM kali persulfat với tỉ lệ thể tích 1:1, sau đó được ủ trong tối trong vòng 16 giờ tại nhiệt độ phòng và được sử dụng trong vòng 2 ngày.
Dung dịch thao tác phản ứng ABTS•+ được pha loãng từ dung dịch gốc trong đệm phosphate 7.4.
Tất cả các mẫu thử đều được pha loãng đến nồng độ thích hợp. Sau đó, 20 µL dung dịch mẫu thử được trộn với 980 µL dung dịch thao tác. Hỗn hợp này được ủ tại nhiệt độ phòng. Đo độ hấp thụ ánh sáng của hỗn hợp này tại bước sóng 734 nm.
Khả năng quét gốc tự do (SA) được tính theo công thức: SA (%) = 100 x (A chứng – A thử) / A chứng
A : mật độ quang
Thí nghiệm được tiến hành lặp lại 3 lần.
Sử dụng phương pháp đường chuẩn để tính IC50. Trolox được sử dụng làm chất chứng dương.