Phương pháp định lượng lactat máu

Các phương pháp đo lactat máu đã được phát kiến từ những năm đầu của thế kỷ 20. Nhiều phương pháp cổ điển sử dụng permanganate hay manganese dioxide để oxy hoá lactat thành acetaldehyde và hoặc CO2 hay CO. Sau đó acetaldehyde có thể được phát hiện bằng spectophtometry, bằng cách hiệu giá hay bằng sắc ký khí (gas chromatography). Carbon monocyt có thể được phát hiện bằng cách hiệu giá hay phân tích đo khí, CO2 định lượng bằng cách đo khí. Các phương pháp này tương đối chính

xác, song đều mất nhiều công sức và thời gian không thích hợp sử dụng trên lâm sàng.

Trong vòng 20 năm gần đây, phương pháp enzym học đã được sử dụng trong hầu hết các phòng xét nghiệm lâm sàng. Phương pháp này dựa trên phản ứng sinh hoá của lactat và NAD để tạo thành pyruvat và NADH, với NADH được phát hiện hoặc bằng phương pháp động học hay quang phổ (end - poit spectophotometry) ở bước sóng 340 nm. Một phương pháp có tên Aca sử dụng lactat dehydrogenase để xúc tác quá trình chuyển lactat thành pyruvat với sự chuyển đồng thời NAD thành NADH. Để thúc đẩy phản ứng hoàn thành, cho thêm hydralazin để bắt pyruvat. Hấp thụ NADH được xác định ở 340 nm và 383 nm, pH được đệm ở 370C bằng Tris tại pH 8,55. Phương pháp cần 40 l huyết tương, khoảng 7 phút để hoàn thành kết quả và có dạng tuyến tính tới khoảng 20 mmol/l. Do có tính chính xác và độ tin cậy rất cao nên phương pháp này thường được các phương pháp khác đem so sánh với nó [11].

Gần đây, phương pháp Slide chất phản ứng đa lớp khô (dry multilayer slide methodology) đối với lactat đã được đưa vào sử dụng của hãng Kadak Ektachem, xét nghiệm cần 10 l huyết tương và sử dụng cả lactat oxidase (LO) như enzym chuyển đổi và peroxidase (PO) để tạo thành sản phẩm màu đo được ở bước sóng 540 nm. Phương pháp này cho dạng tuyến tính tới khoảng nồng độ 15 mmol/l và cho kết quả trong khoảng 6 phút.

Một phương pháp phân tích lactat xuất hiện với sự phát kiến ra đầu nhận cảm điện hoá học đối với lactat. Đo lactat trong máu toàn phần trong vòng 2-3 phút, phương pháp này rất hữu ích trong theo dõi các ca cấp cứu, và thường được làm cùng với xét nghiệm khí máu.

Bằng cách sử dụng một phương pháp cải tiến của đầu cảm nhận enzym điện hoá học được phát minh lúc đầu bởi Williams và cộng sự,

Racine và cộng sự sáng chế ra máy phân tích lactat trên 50 l máu hoà loãng, huyết thanh hay dịch não tuỷ trong vòng 3 phút. Việc đo đạc được dựa trên oxy hoá lactat thành pyruvat với sự có mặt của cytochrome B2 và ion hexacyanoferrate. Dòng điện phát sinh trong phản ứng cuối cùng có liên quan với nồng độ lactat trong dung dịch. Phương pháp cho kết quả tuyến tính tới 9 mmol/l và được so sánh tương đối tốt với phương pháp enzym quang phổ [17].

Một bộ phận nhận cảm lactat được Clark và cộng sự phát minh cho phép đo lactat trực tiếp trong máu toàn phần trong khoảng thời gian <1 phút và trên mẫu bệnh phẩm 10l. Bộ phận nhận cảm là một điện cực enzym cực phổ (polarographic enzym electrode) làm phát sinh một dòng điện liên quan tuyến tính với nồng độ lactat. Máy cho kết quả chính xác với khoảng giao động ± 10% và tuyến tính trong khoảng giá trị 10 mmol/l, một chênh lệch âm khoảng 5% được ghi nhận khi so sánh với phương pháp enzym quang phổ. Sự chênh lệch này không được coi là có ý nghĩa lâm sàng.

Mặc dù các máy phân tích trên cho thấy một tiến bộ hữu dụng trong đánh giá lactat, trong khi sử dụng máy phân tích máu toàn phần hoà loãng có thể gây ra các khó khăn như các biến đổi do hematocrit hay tính tương thích với kết quả trên huyết tương. Mellen và cộng sự đã phát minh ra một điện cực enzym đo lactat trong máu toàn phần không hoà loãng. Điện cực này giúp khắc phục nhược điểm của phương pháp đo máu toàn phần hoà loãng.

Gần đây nhất, nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng định lượng lactat trong máu toàn phần là tốt hơn, nó chỉ cần lấy ít máu, cho kết quả nhanh và có thể tiến hành cùng với xét nghiệm khí máu.

Sự khác biệt giữa giá trị lactat của máu động mạch với máu tĩnh mạch.

Giới hạn tham khảo được báo cáo đối với lactat máu động mạch khoảng 0,3 – 1,5 mmol/l; đối với máu tĩnh mạch khoảng 1,8 mmol/l [5].

Qua nghiên cứu của Weil MH và cộng sự (1987) theo dõi lactat máu động mạch, tĩnh mạch, tĩnh mạch trung tâm và động mạch phổi ở 35 BN nhận thấy sự chênh lệch giá trị lactat máu lấy từ 4 vị trí khác nhau từ 0,029- 0,03 mmol/l [11].

Theo tác giả Murdoch I.A và cộng sự (1994) nghiên cứu lactat máu lấy từ động mạch và tĩnh mạch phổi thấy giá trị chênh lệch nhau không nhiều 0,02 mmol/l (0,2 - 0,24 mmol/l). Như vậy để xét nghiệm lactat máu, ta có thể lấy máu động mạch, tĩnh mạch hoặc từ tĩnh mạch trung tâm cũng không có sự khác biệt [5].