lượng (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1
H-NMR) và hai chiều (2D- NMR) và so sánh dữ liệu phổ thu được với các dữ liệu phổ đã công bố.[11]
2.3.2. Nghiên cứu độc tính cấp và tác dụng chống viêm cấp
2.3.2.1. Nghiên cứu độc tính cấp Phương pháp Phương pháp
Theo "Phương pháp xác định độc tính của thuốc". LD50 được tính theo phương pháp Behrens-Karber được mô tả bởi Đỗ Trung Đàm [5]. Phương pháp thử độc tính cấp theo mô hình cổ điển kết hợp với một số hướng dẫn trong OECD 420 [28].
Mẫu thử
Cao toàn phần EtOH chiết xuất từ cây Dây đòn gánh (Cắn cao toàn phần, độ ẩm 6,23%).
Cách tiến hành
- Chuột nhắt trắng mua về được nuôi 4 ngày trước khi thí nghiệm để chuột thích nghi điều kiện thí nghiệm, cho ăn uống theo hướng dẫn. Trước khi thí nghiệm, cho chuột nhịn đói khoảng 12 giờ, để nước uống theo nhu cầu của chuột. Chuột được chia ngẫu nhiên thành các lô thí nghiệm (mỗi lô 10 chuột), mỗi lô chuột được uống các mức liều khác nhau của mẫu thử:
Lô 1: uống liều 4g cao EtOH/ kg Lô 2: uống liều 8g cao EtOH/kg
20 Lô 3: uống liều 12g cao EtOH/kg
- Đường dùng thuốc: đường uống, cho chuột uống bằng cách dùng kim tiêm có kim đầu tù để đưa mẫu thử một cách nhẹ nhàng vào dạ dày chuột.
- Mẫu thử: Cao ethanol được cân chính xác một lượng, thêm một lượng chính xác nước, nghiền mịn (100, 200, 300 mg cao EtOH/ ml nước cất). Chuột được cho uống cao với những liều khác nhau tính theo gam cao/kg thể trọng chuột. Thử các liều tương đương 48g, 96g, 144g dl/ kg thể trọng chuột (ngoại suy tương đương 200, 400, 600 g dl/ ngày ở người, tính quy ước hệ số 12, cân nặng mỗi người 50kg). Cho các lô chuột uống cùng thể tích 0,4 ml nước cao/ 10g thể trọng.
- Thời gian theo dõi: Sau khi được uống mẫu thử, chuột được cho ăn và uống đầy đủ. Theo dõi và quan sát các biểu hiện về hành vi, hoạt động, ăn uống, bài tiết của chuột và số chuột sống chết trong 3 ngày (72 giờ).
- Sau khi thử nghiệm thăm dò, động vật thí nghiệm được chia thành 6 lô, mỗi lô 10 con (thử nghiệm chính thức). Tìm liều tối đa mà không có chuột nào của lô thí nghiệm chết (LD0) và liều tối thiểu để 100% chuột của lô thí nghiệm chết (LD100). Thử thêm 2 - 4 liều trung gian giữa 2 liều nói trên để xác định LD50.
- Theo dõi động vật trong vòng 7 ngày sau khi dùng mẫu thử (theo dõi liên tục trong vòng 4 giờ đầu, theo dõi thường xuyên trong vòng 72 giờ sau).
Thông số đánh giá
- Trong vòng 72 giờ sau khi uống thuốc, ghi chép lại các thông số sau: Tình trạng chung của chuột: hoạt động tự nhiên, tư thế, màu sắc
(mũi, tai, đuôi), lông, phân, nước tiểu ... Sự tiêu thụ thức ăn, nước uống.
Số động vật chết: xác định tỷ lệ động vật chết ở các lô trong vòng 72 giờ để tính toán LD50.
21
Nếu cần, làm thêm vi thể để xác định nguyên nhân.
- Tiếp tục theo dõi động vật cho đến thời điểm 7 ngày sau khi uống thuốc.
- Xác định LD50 (nếu có)
- Công thức tính: LD50 = LD100 - (d x z) n Trong đó:
d: hiệu số của hai liều kế tiếp
z: trung bình số chuột chết giữa 2 liều kế tiếp n: số chuột trong 1 lô