phẩm enzyme chitinase [4], [20]
Chuẩn bị:
Dung dịch tơ nấm bệnh: Nuôi cấy nấm Rhizoctonia solani trên MT CYA. Sau đó thu các tơ nấm cho vào 5ml nước muối sinh lý.
24 bình tam giác 50ml, mỗi bình chứa 10ml MT lỏng CYB;
Dung dịch TTN Mathian 90SP 4%: cân 0,16g TTN hòa vào 4ml nước cất vô trùng Dung dịch enzyme chitinase thô 4%: cân 0,16g CPE thô hòa vào 4ml nước cất vô trùng
Tiến hành
Cho vào mỗi bình tam giác 0,2ml dịch vi nấm gây bệnh. Sau đó lần lượt cho TTN và CPE theo 4 nghiệm thức sau, mỗi nghiệm thức lặp lại 6 lần (3 lần cho đối chứng, 3 lần cho thí nghiệm)
NT1: không cho gì thêm
NT2: cho vào 0,5ml dung dịch TTN 4% NT3: cho vào 0,5ml CPE 4%
NT4: cho vào 0,25ml CPE 4% + 0,25ml dung dịch TTN 4%
Tiến hành lọc 12 bình đối chứng (mỗi nghiệm thức 3 bình) đem sấy khô ở nhiệt độ 100P
0
P
C, cân và ghi nhận lại kết quả. 12 bình còn lại đem nuôi lắc trong thời gian 4 – 5 ngày, sau đó đem lọc, sấy khô và cân. Trừ đối chứng ta được thu khối lượng tăng sau khi nuôi của mỗi nghiệm thức đó là sinh
khối của nấm bệnh. Sau đó lấy sinh khối của nghiệm thức 1 trừ đi sinh khối của nghiệm thức 2, 3, 4 ta được khối lượng sinh khối giảm sau khi xử lý.
2.2.15. Ứng dụng chế phẩm chitinase vào việc ức chế BT nấm Fusarium oxysporum nảy mầm [4],
[46]
Chuẩn bị:
- Dịch BT nấm bệnh: nuôi cấy nấm bệnh Fusarium oxysporum trên MT CYA trong 7 ngày. Sau đó thu BT cho vào 5ml nước muối sinh lý ta thu được dịch nấm bệnh. Xác định mật độ BT trong dịch nấm bệnh bằng phương pháp đếm bằng buồng đếm hồng cầu
- Dung dịch enzyme chitinase 4% bằng cách cân 0,16g CPE thô hòa vào 4ml nước cất vô trùng - Các ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lý vô trùng để pha loãng dịch BT
Tiến hành thí nghiệm
Thí nghiệm được tiến hành trên 2 nghiệm thức, 3 lần lặp lại
NT1: (đối chứng) cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch BT nấm bệnh và 0,5ml nước muối sinh lý NT2: cho vào ống nghiệm 0,5ml dịch BT nấm bệnh và 0.5ml dịch enzyme chitinase 4%
Để các ống nghiệm trong thời gian 12 giờ. Sau đó pha loãng dịch BT sao cho mật độ BT khoảng 600.10P 5 P -700.10P 5 P
BT/1ml. Lấy 0,05ml dịch BT đã được pha loãng ở mỗi nghiệm thức cấy trang trên đĩa petri chứa MT CYA, để các đĩa petri này ở nhiệt độ phòng, sau 48 giờ lấy ra đếm sô KL vi nấm nhằm xác định số lượng BT có khả năng nảy mầm sau khi xử lý bằng CPE.
Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN