[4], [10], [23], [32], [33]
2.2.11.1 Khảo sát ảnh hưởng của nguồn carbon trong MT nuôi cấy
Nguyên tắc: Nuôi cấy NS trên các MT có nguồn C khác nhau, từ đó xác định nguồn C thích hợp nhất cho quá trình sinh tổng hợp chitinase.
Tiến hành: Nuôi cấy 2 chủng NS trong MT bán rắn (MT1), lần lượt thay cám bằng bột bắp, bột bắp trích béo, bột đậu nành, bột đậu nành trích béo, bột mì ngang trong khoảng thời gian 3 ngày. Thu lấy dịch chiết enzyme thô, xác định HL protein và HT chitinase như ở mục 2.2.9 và 2.2.10. So sánh kết quả từ đó chọn ra nguồn C thích hợp.
2.2.11.2.Khảo sát thời gian nuôi cấy
Nguyên tắc: Tùy từng giai đoạn sinh trưởng khác nhau, khả năng sinh tổng hợp enzyme ngoại bào của NS sẽ khác nhau.
Cách tiến hành: Nuôi cấy chủng NS P. citrinum trong MT1 có cám và A. protuberus trong MT1 có bột bắp trích béo. Thu dịch chiết enzyme ở những thời điểm 24h, 36h, 48h, 60h, 72h, 84h. Thu lấy dịch chiết enzyme thô, xác định hàm lượng protein và HT chitinase như ở mục 2.2.9 và 2.2.10. So sánh kết quả từ đó chọn ra thời gian thích hợp cho 2 chủng NS.
2.2.11.3. Khảo sát pH của MT
Nguyên tắc: Thay đổi pH của MT để tìm ra pH thích hợp cho quá trình tổng hợp chitinase của 2 chủng NS được chọn.
Cách tiến hành: Nuôi chủng NS P. citrinum trên MT1 chứa cám trong thời gian 40 giờ và A. protuberus trên MT1 chứa bột bắp trích béo trong thời gian 50 giờ. Cả 2 chủng được nuôi trong các MT có độ pH khác nhau 4; 4,5; 5,0; 5,5; 6,0; 6,5 (Dùng NaOH 1N và HCl 1N để thay đổi pH MT). Thu lấy dịch chiết enzyme thô, xác định hàm lượng protein và HT chitinase như ở mục 2.2.9 và 2.2.10. So sánh kết quả từ đó chọn ra pH MT ban đầu thích hợp.
2.2.11.4. Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy
Nguyên tắc: Thay đổi nhiệt độ MT nuôi cấy để tìm ra nhiệt độ thích hợp cho quá trình tổng hợp chitinase của 2 chủng NS được chọn.
Tiến hành: Nuôi chủng NS P. citrinum trên MT1 chứa cám trong thời gian 40 giờ, pH = 4,5 và
A. protuberus trên MT1 chứa bột bắp trích béo trong thời gian 50 giờ, pH = 5,0. Cả 2 chủng được nuôi ở các nhiệt độ khác nhau 20, 25, 30, 35, 40, 45P
0
P
C. Thu lấy dịch chiết enzyme thô, xác định hàm lượng protein và HT chitinase như ở mục 2.2.9 và 2.2.10. So sánh kết quả từ đó chọn ra nhiệt độ MT thích hợp.
2.2.11.5. Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ NaCl
Nguyên tắc: Thay đổi nồng độ NaCl của MT nuôi cấy để tìm ra nồng độ NaCl thích hợp cho quá trình tổng hợp chitinase của 2 chủng NS được chọn.
Tiến hành: Nuôi chủng NS P. citrinum trên MT1 chứa cám trong thời gian 40 giờ, pH = 4,5, nhiệt đô 40P
0
P
C và A. protuberus trên MT1 chứa bột bắp trích béo trong thời gian 50 giờ, pH = 5,0, nhiệt độ 30P
0
P
C. Bổ sung muối NaCl vào MT nuôi cấy với các nông độ khác nhau 0, 2, 4, 6, 8, 10%. Thu lấy dịch chiết enzyme thô, xác định hàm lượng protein và HT chitinase như ở mục 2.2.9 và 2.2.10. So sánh kết quả từ đó chọn ra nồng độ muối MT thích hợp.
2.2.11.6.Khảo sát hàm lượng cơ chất chitin
Nguyên tắc: Dùng các hàm lượng cơ chất chitin khác nhau để xác định nồng độ chitin thích hợp cho quá trình tổng hợp chitinase của 2 chủng NS được chọn.
Tiến hành: Nuôi chủng NS P. citrinum trên MT1 chứa cám, pH = 4,5, nồng độ muối 2%, nhiệt đô 40P
0
P
C trong thời gian 40 giờ, và A. protuberus trên MT1 chứa bột bắp trích béo pH = 5,0, nồng độ muối 0%, nhiệt độ 30P
0
P
C, trong thời gian 50 giờ. Cho vào MT các hàm lượng chitin khác nhau 0, 5, 10, 15, 20%. Thu lấy dịch chiết enzyme thô, xác định hàm lượng protein và HT chitinase như ở mục 2.2.9 và 2.2.10. So sánh kết quả từ đó chọn ra hàm lượng chitin MT thích hợp.