rankl:HSE:CFP
2.4.1.1. Ánh sáng, nhiệt độ, nước nuôi cá
Cá đƣợc nuôi trong phòng thí nghiệm với chu kì sáng - tối là 14 giờ - 10 giờ, nhiệt độ phòng duy trì bằng điều hòa nhiệt độ đặt ở 28ºC, dao động trong khoảng 26-30ºC. Nguồn nƣớc nuôi cá đƣợc lấy từ hệ thống nƣớc sạch, phơi ít nhất một tuần cho bay khí Clo. Sau 2 tuần tiến hành thay nƣớc cho cá bằng cách rút bỏ 1/3 lƣợng nƣớc cũ, cặn bẩn dƣới đáy và loại bỏ bớt rêu tảo và bổ sung nƣớc mới thay thế.
Cá medaka trƣởng thành hơn ba tháng tuổi đƣợc nuôi trong những khay riêng, tách biệt với ấu trùng, vì chúng sẽ ăn những con ấu trùng cá nhỏ hơn. Thậm chí, ngay cả những con ấu trùng lớn hơn sẽ tấn công và ăn những con ấu trùng nhỏ hơn, vì vậy phải nuôi cá trong những khay khác nhau dựa trên kích thƣớc của con cá. Khoảng 6-8 cá medaka trƣởng thành đƣợc nuôi trong mỗi khay nhựa Song long 11,5 lít nƣớc, với tỉ lệ đực : cái khoảng 1:2. Mỗi khay cá có một thiết bị lọc nƣớc nhỏ để môi trƣờng nƣớc luôn trong sạch, tăng nồng độ oxi hòa tan. Có thể thêm vào
25
khay vài nhánh rong và một vài ốc nhỏ tạo hệ sinh cảnh nhỏ giúp điều hòa và cân bằng môi trƣờng nƣớc nuôi cá (Hình 2.1).
Đối với cá nhỏ hơn hai tháng tuổi, chúng tôi nuôi 13-15 con trong những khay nhỏ chứa 6 lít nƣớc, đƣợc làm sạch và hút hết cặn bẩn hàng ngày.Thay nƣớc 3 ngày 1 lần bằng cách rút ra 1/3 lƣợng nƣớc trong khay nuôi, sau đó bổ sung thêm nƣớc mới thay thế.
Phôi cá và cá con mới nở đến một tháng tuổi, đƣợc nuôi bằng nƣớc lọc thẩm thấu ngƣợc RO có bổ sung thêm muối nuôi cá với nồng độ 60mg/l. Để 20 phôi trong một đĩa petri nuôi trong tủ ấm và duy trì nhiệt độ ổn định trong tủ ở 28ºC. Các đĩa đƣợc ghi nhãn rõ ràng với tên dòng cá và ngày thu. Khoảng 5 ngày sau khi cá nở thành ấu trùng (vào khoảng 7 ngày tuổi), chuyển ấu trùng sang khay nhựa chứa 1,4 lít nƣớc. Khay hoặc đĩa petri bẩn đƣợc rửa sạch bằng nƣớc và ngâm trong cồn 70º từ 1 đến 2 ngày để hạn chế nhiễm nấm hay vi khuẩn gây bệnh. Mặc dù không dùng thiết bị lọc nƣớc cho ấu trùng và cá con nhƣng phải chăm sóc chúng kỹ lƣỡng hơn cá trƣởng thành. Hàng ngày hút chất bẩn và vệ sinh khay thƣờng xuyên để tránh tạo lớp váng bụi bẩn hoặc nấm phát triển trên bề mặt nƣớc, dễ gây bệnh hoặc thiếu oxi có thể làm cá chết.
26
2.4.1.2. Thức ăn cho cá và cách cho cá ăn
Chúng tôi sử dụng thức ăn chuyên dùng cho cá medaka của hãng Hikari, Nhật Bản (http://kyorin-net.co.jp/), có nhiều loại thức ăn đƣợc dùng phù hợp cho theo từng giai đoạn phát triển của cá (Bảng 2.3).
Bảng 2.3: Tỷ lệ dinh dƣỡng của thức ăn cho từng giai đoạn phát triển của cá
Protein Lipid Chất xơ Tro Phospho Độ ẩm Cá trƣởng thành ≥ 48% ≥ 5% ≤ 2% ≤ 16% ≥ 1,0% < 10% Cá con ≥ 48% ≥ 3% ≤ 2% ≤ 18% ≥ 1,36% < 10% Cá trƣởng thành cần kích thích đẻ trứng ≥ 51% ≥ 9% ≤ 2% ≥ 17% ≥ 1% < 10%
Cho cá ăn 3 lần/ngày vào khoảng 8:00, 12:00 và 17:00 hàng ngày. Cho cá ăn với một lƣợng vừa đủ để cá ăn hết thức ăn trong 3 phút, tránh cho quá nhiều sẽ làm nƣớc nhanh bẩn những cũng không nên cho cá ăn quá ít và phải cho cá ăn đúng giờ.
2.4.1.3. Phương pháp ghép cá đẻ và thu phôi cá
Để cá đẻ đều thì cần phải duy trì điều kiện nuôi cá và nguồn thức ăn ổn định. Cá đực và cá cái đƣợc nuôi chung trong cùng một bể với số lƣợng từ 10-20 cá thể trƣởng thành với tỷ lệ đực : cái là 1:2. Khác với cá zebrafish, cá medaka trƣởng thành thƣờng đẻ 20-30 trứng/ngày và trứng sau khi đẻ dính vào bụng mẹ trong khoảng 16-24 tiếng [42].
Cá bố mẹ có thể đƣợc tách riêng trƣớc ngày cần thu trứng, sau đó tiến hành ghép cá bố mẹ vào sáng hôm sau (7-9 giờ sáng), sau khi ghép khoảng 15-30 phút thì cá mẹ đẻ. Sau khi cá đẻ và quan sát trứng đã đƣợc thụ tinh, tiến hành thu trứng và cho vào dung dịch nƣớc muối nuôi phôi và loại bỏ những trứng không đƣợc thụ tinh.
27
2.4.1.4. Phương pháp nuôi phôi và chăm sóc cá con
Phôi cá đƣợc nuôi trong đĩa petri với dung dịch nƣớc muối nuôi cá nồng độ 60 mg/l. Sau 7-10 ngày tuổi, phôi nở thành ấu trùng cá, 5 ngày sau khi nở chuyển sang khay nuôi cá con và cho thức ăn của cá con.
Cá con đƣợc nuôi trong nƣớc lọc RO bổ sung muối biển và cho ăn 3 lần/ngày (xem mục 2.4.1.1 và 2.4.1.2)