xƣơng không đồng nhất do có đặc điểm di truyền của gen chuyển khác nhau
Dòng cá chuyển gen rankl:HSE:CFP ban đầu đƣợc nhận từ ĐHQG Singapo bao gồm các cá thể có mức độ bị tổn thƣơng xƣơng khoáng hóa khác nhau dƣới cùng một điều kiện sốc nhiệt [78] (Hình 1.5B) . Sự tổn thƣơng không đồng đều này có thể là do sự không đồng nhất về đặc điểm di truyền của gen chuyển rankl nhƣ giải thích ở Hình 1.6 gây ra do hạn chế của kĩ thuật chuyển gen (chuyển bằng kỹ thuật dùng meganuclease) và do cách dòng cá này đƣợc duy trì (duy trì bằng cách nội phối qua nhiều thế hệ).
13
Hình 1.6: Sự không đồng nhất về di truyền với gen chuyển của cá chuyển gen
rankl:HSE:CFP ban đầu
Cá chủng dại với màu cam nhạt, cá chuyển gen với các mức màu xanh tương ứng với đặc điểm di truyền của gen chuyển khác nhau. (1): Tạo cá chuyển gen rankl:HSE:CFP bằng cách tiêm plasmid mang gen chuyển (ô xanh tím than) vào phôi cá chủng dại giai đoạn một tế bào, kết quả là tạo ra các cá thể cá chuyển gen (founders; đại diện bởi F01, F02, F03) khác nhau về đặc điểm di truyền của gen chuyển (về vị trí của gen chuyển trong hệ gen và số bản copy của gen chuyển). (2) Việc duy trì dòng cá bằng cách hỗn phối qua nhiều thế hệ cũng làm các cá thể của dòng cá này (progenitor founders; đại diện bởi PG1, PG2, PG3) không đồng nhất về di truyền của gen chuyển giữa các cá thể.
14
Sự khác nhau về vị trí đoạn chèn cũng nhƣ số đoạn chèn chứa gen chuyển
rankl trong hệ gen của các cá thể có thể dẫn tới mức độ biểu hiện Rankl khác nhau gây ra các mức độ tổn thƣơng xƣơng khác nhau ở các cá thể cá chuyển gen ban đầu. Sự không đồng nhất về mức độ tổn thƣơng xƣơng ở các cá thể cá chuyển gen ban đầu này gây khó khăn trong việc sử dụng dòng cá làm mô hình bệnh loãng xƣơng để đánh giá hoạt tính của chất chống loãng xƣơng. Do vậy, chúng tôi phải tiến hành lai để phân tách dòng cá gốc tìm ra một số dòng cá có sự đồng nhất về di truyền với gen chuyển rankl và kiểu hình loãng xƣơng trong các cá thể cùng dòng.