4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.4.1.RT-PCR nhân vùng 3Ỗ bộ gen potyvirus
để nhân vùng 3Ỗ của bộ gen potyvirus, chúng tôi sử dụng 3 mồi N1T , N1 và NIbFor1 ựã ựược công bố trước ựây (Hà Viết Cường et al., 2008) ựể thực hiện phản ứng RT-PCR 2 bước. Bước 1 là tổng hợp sợi cDNA dùng mồi N1T và bước 2 là phản ứng PCR dùng mồi NIbFor1 (là mồi chung gắn vào một trình tự bảo thủ trên gen NIb của potyvirus) và mồi N1 (tương ựồng với phần 5Ỗ của mồi N1T) (hình 4.7). Trình tự mồi cũng như qui trình phản ứng ựược trình bày chi tiết trong phần vật liệu và phương pháp.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 45
Hình 4.7. Sơ ựồ tổ chức bộ gen potyvirus và vị trắ tương ựối của 3 mồi NIbFor1, N1 và mồi N1T.
Chúng tôi tiến hành thực hiện phản ứng RT-PCR trên các mẫu chiết RNA tổng số từ cây loa kèn ựỏ bị bệnh ựã phản ứng dương với cặp mồi CIFor/CIRev từ trước. Kết quả RT-PCR ựược trình bày ở Bảng 4.6 và Hình 4.8.
Kết quả RT-PCR cho thấy tất cả các mẫu ựều dương tắnh và tạo băng sản phẩm khoảng 1.6 kb. Hai mẫu LKđ-1 và LKđ-4 sẽ ựược chọn ựể dòng hóạ
Bảng 4.6: Kết quả RT-PCR nhân vùng 3Ỗ bộ gen potyvirus trên hoa loa kèn ựỏ STT Mẫu RNA Sản phẩm RT-PCR ((kb) 1 LKđ-1 Chiết năm 2010 ~ 1.6 2 LKđ-2 Chiết năm 2010 ~ 1.6 3 LKđ-3 Chiết năm 2011 ~ 1.6 4 LKđ-4 Chiết năm 2010 ~ 1.6
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 46
Hình 4.8: Kết quả RT-PCR nhân vùng 3Ỗ bộ gien potyvirus trên hoa loa kèn ựỏ
(M là thang DNA (GeneRuler 1 kp, Fermentas), giếng số 1 ựến số 4 tương ứng với mẫu số 1 ựến mẫu số 4)