CHƯƠNG 3 THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.4.3. Về xây dựng quy trình định tính bằng HPTLC
Để đảm bảo độ chính xác và độ lặp lại thì việc sàng lọc các yếu tố ảnh hưởng chính để xây dựng quy trình định tính là cần thiết để có được kết quả tối ưu.
Về phương pháp chiết xuất: Phương pháp hồi lưu cho khối lượng cắn lớn nhất trong 3 phương pháp chiết xuất thử nghiệm. Kết quả khảo sát thực nghiệm cho thấy việc tác động nhiệt (50-60oC) không ảnh hưởng đến sự ổn định các thành phần hóa học trong dịch chiết. Ngoài ra, xét về hiệu quả thời gian, việc tác động nhiệt đẩy nhanh quá trình chiết xuất và giúp tiết kiệm thời gian hơn phương pháp ngâm lạnh và ngấm kiệt. Vì vậy, việc lựa chọn phương pháp hồi lưu là hợp lý, tuy nhiên cần lưu ý kiểm soát nhiệt độ, duy trì trong khoảng 50-60o
C trong quá trình gia nhiệt. Về định tính các nhóm chất chính có trong các phân đoạn dịch chiết: Saponin và flavonoid chủ yếu tập trung trong phân đoạn ethylacetat và n-butanol. Trong phân đoạn n-hexan không có saponin và flavonoid; phân đoạn nước chỉ còn saponin với lượng nhỏ (phản ứng dương tính không rõ). Điều này giúp nghiên cứu tập trung vào hai phân đoạn ethylacetat và n-butanol cùng với dịch chiết toàn phần, và bước đầu khu trú các hệ dung môi có thể sử dụng để phân tích TLC.
Về hệ dung môi pha động: Hệ dung môi pha động là yếu tố quan trọng quyết định độ phân giải của kết quả sắc ký đồ. Dựa vào kết quả định tính, việc sàng lọc hệ dung môi pha động được tập trung chủ yếu vào hệ của hai nhóm chất chính cần phân tích là saponin và flavonoid. Hệ dung môi pha động là một trong những yếu tố quan trọng nhất tác động đến kết quả sắc ký đồ. Do đó, việc lựa chọn được hệ dung môi cho độ phân giải cao là điều cần thiết. Kết quả cho thấy, hệ dung môi S.2 chloroform:methanol:acid formic (10:1,1:0,2) và hệ dung môi F.11 benzen:aceton (34:6) cho kết quả tách tốt nhất.
Như vậy, nghiên cứu đã bước đầu sàng lọc được một số yếu tố ảnh hưởng chính đến phân tích định tính TLC, tuy nhiên còn tồn tại nhiều yếu tố ảnh hưởng khác như khoảng khai triển, thể tích mẫu chấm... cần được sàng lọc để có được quy trình tối ưu nhất.