Đem chất K1 tinh khiết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ UV, phổ IR, phổ MS. 3.11.1. Nhiệt độ nóng chảy của K1: 205,40C.
3.11.2. Phổ UV của chất K1: được giới thiệu ở phần phụ lục hình P13.
Phổ UV cho thấy chất K1 có 2 đỉnh hấp thụ cực đại ở bước sóng 443nm và 289nm
3.11.3. Phổ IR
Phổ IR của chất K1 được giới thiệu ở phần phụ lục hình P14. Dựa vào các đỉnh hấp thụ trên phổ IR (hình P12) có thể dự đoán trong cấu trúc phân tử kháng sinh có các liên kết đặc trưng sau:
494,08cm-1; 611,95 cm-1; 649,45 cm-1 đặc trưng cho liên kết C- X (X= Br, I).
791,43 cm-1 đặc trưng cho liên kết C-H ở trong nhân thơm, hoặc alken.
992,34 cm-1 đặc trưng cho liên kết C – H trong alken.
1096,82 cm-1,1193,25 cm-1; 1278,98 cm-1 đặc trưng cho liên kết C- F; C-N; C-O.
1474,53 cm-1 đặc trưng cho liên kết C= C trong vòng benzen.
1579,01 cm-1 đặc trưng cho liên kết C=C trong vòng benzen, hoặc liên kết N- H.
1632,58 cm-1; 1656,69 cm-1 đặc trưng cho liên kết C=C trong alken; hoặc C=O trong nhóm chức amid.
1745,09 cm-1 đặc trưng cho liên kết C=O trong nhóm chức ester.
Chủng nấm Chủng gốc ĐB 3.10 ĐB 3.10.1
(mm) s (mm) s (mm) s
Aspergillus sp. 514 0 0 0 0 0 0
2888,95 cm-1 đặc trưng cho liên kết C- H trong alkan; hoặc aldehyd.
2966,31 cm-1 đặc trưng cho liên kết C – H trong alkan.
3099,91 cm-1 đặc trưng cho liên kết C-H trong alken hoặc trong nhân thơm.
3437,45 cm-1 đặc trưng cho liên kết N-H trong amid, amin bậc 1, bậc 2. 3.11.4. Phổ MS
Phổ MS của chất K1 được giới thiệu trong hình P13 phần phụ lục. Phổ MS được đo bằng phương pháp EI+ ( bắn phá bằng electron) cho phép xác định khối lượng phân tử của chất kháng sinh là 656,22 dalton.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
KẾT LUẬN
Qua quá trình nghiên cứu cơ bản, tôi đã hoàn thành được mục tiêu đề ra và rút ra một số kết luận sau:
1. Kết quả ISP có thể sơ bộ kết luận, chủng Streptomyces 183.221 gần giống với chủng Streptomyces flavescens.
2. Streptomyces 183.221 được phân lập từ cơ chất Việt Nam, qua quá trình
cải tạo chọn giống đã thu được các biến chủng có khả năng sinh tổng hợp kháng
sinh tốt hơn chủng gốc. Kháng sinh do Streptomyces 183.221 có những đặc điểm
sau:
Có ít nhất 2 thành phần có hoạt tính kháng sinh.
Phổ rộng, tác dụng tốt trên vi khuẩn Gr (+), Gr (-), không có khả năng
kháng Aspergillus sp. 514, Microsporum sp. 014.
Tan trong DMHC thông thường: Methanol, Ethylacetat,… Chiết được bằng phương pháp sử dụng DMHC, dung môi chiết thích hợp là Ethylacetat ở pH= 7.
Tương đối bền với nhiệt, pH tối ưu là pH 5-7.
3. Streptomyces 183.221 có khả năng sinh tổng hợp tốt trên MT nuôi cấy là
MT1, MT2, MT7. Lên men chìm, MT2dt và biến chủng ĐB 3.10.21 tạo điều kiện thuận lợi cho sinh tổng hợp kháng sinh.
4. Chất K1 thu được có tính chất sau: t0nc= 205,40C, khối lượng phân tử 656,22 dalton, có các liên kết C – H; C= C; C=O; N-H;…
ĐỀ XUẤT
1. Tiếp tục nghiên cứu tên khoa học của xạ khuẩn Streptomyces 183.221.
2. Để nâng cao hơn nữa khả năng sinh tổng hợp kháng sinh tiếp tục tiến hành đột biến bậc thang kết hợp phương pháp di truyền phân tử.
3. Lên men trên quy mô lớn sau đó chiết xuất và tinh chế nhằm thu kháng sinh để tiến hành xác định cấu trúc, tính chất lý hóa, đồng thời nghiên cứu khả năng
TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT
1. Bộ môn hóa Dược (1998), Hóa Dược II, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà
Nội, tr. 37-54.
2. Bộ môn hóa phân tích (2006), Hóa phân tích II, Trường Đại học Dược Hà
Nội, Hà Nội, tr. 23-69, 125-147, 215-219, 318.
3. Bộ môn Vi sinh- sinh học (2005), Thực tập vi sinh- ký sinh, Trường Đại học
Dược Hà Nội, Hà Nội, tr. 37-54.
4. Bộ Y tế (2007), Dược lý học, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, tập 2, tr. 130-142.
5. Bộ Y tế (2008), Vi sinh vật học, NXB Giáo dục.
6. Kiều Hữu Ảnh (1999), Vi sinh vật học công nghiệp, NXB Khoa học kỹ thuật,
Hà Nội, tr. 167-172.
7. Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ len men các chất kháng sinh, NXB
Khoa học kỹ thuật, Hà Nội.
8. Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Kim Nữ Thảo (2006), Các nhóm vi khuẩn chủ yếu- Phân loại xạ khuẩn.
http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/cacnhomvikhuanchuyeu.htm.
9. Đỗ Thu Hà và cộng sự (1999), Vấn đề kháng kháng sinh của vi khuẩn, NXB Y
học.
10. Phạm Thị Hạnh (2010), Nghiên cứu sinh tổng hợp kháng sinh nhờ Streptomyces 119.112, Luận văn thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội,
Hà Nội.
11. Lương Thị Hương Giang (2011), Tuyển chọn và nghiên cứu hoạt tính sinh học của một số chủng xạ khuẩn phân lập ở núi Pháo- Đai Từ- Thái nguyên, Khóa
luận tốt nghiêp, Trường Đại học Khoa học- Đại học Thái Nguyên, Thái Nguyên. 12. Nguyễn Khang (2005), Kháng sinh học ứng dụng, NXB Y học Hà Nội, Hà
Nội.
13. Từ Minh Koóng (2004), Cơ sở Công nghệ sinh học và sản xuất Dược phẩm,
14. Từ Minh Koóng, Đàm Thanh Xuân(2006), Kỹ thuật sản xuất Dược phẩm,
tập II, Trường Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội, tr. 26-40, 81-93.
15. Khuất Hữu Thanh (2005), Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen, Nhà xuất
bản Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr. 185-191.
16. Hồ Viết Quý (2002), Chiết tách, phân chia, xác định các chất bằng dung môi hữu cơ, Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tập 1, tr. 9-27.
TIẾNG ANH
17. M.V. Arasu, V. Duraipandiyan, S. Ignacimuthu (2012), Antibacterial and antifungal activities of polyketide metabolite from marine Streptomyces sp. AP-123 and its cytotoxic effect, Department of Biological Environment and Chemistry,
College of Agriculture and Life Sciences, Chungnam National University [pubmed].
18. T.Brautaset T, H. Sletta (2011) , New nystatin-related antifungal polyene macrolides with altered polyol region generated via biosynthetic engineering of Streptomyces noursei, Department of Biotechnology, SINTEF Materials and Chemistry, Trondheim, Norway.
19. Masoud Ataiekhorasgani, Nasim Jafaripozve, Omid Zaerin (2014)
“Streptomyces infection in Cushing syndrome: A case report and literature review”,
Department of Internal Medicine, School of Medicine, Isfahan University of Medical Science, Isfahan, Iran. [pubmed].
20. L. Pavia, M. Lampman, S. Kriz (2008), Introduction to Spectrocopy, pp. 13-
100
21. T. Murakami, J. Burian, Koji Yanai, Mervyn J. Bibb, (2011), “ novel system for the amplification of bacterial geneclusters multiplies, antibiotic yeild in
Streptomyces coeliolor” , Department of Microbiology and Immunology,
University of British Columbia, Vancouver, BC, Canada. [pubmed].
22. E.B.Shirling and D.Gottlied (1996), “ Methods for characterization of Streptomyces speacis”, International Journal of systematic Bacteriology, Vol.16 No.
PHỤ LỤC
Hình P1: Các loại khuẩn ty ở xạ khuẩn.
1- Pha lag ( pha ti 2- Pha log ( pha l 3- Pha dừng. 4- Pha cân bằng. X: Số lượng tế bào
Hình P3: Đường cong sinh trư Log X
Pha lag ( pha tiềm tàng). pha lũy thừa).
bào
Hình P4: Hình ảnh chuỗi bào tử Streptomyces 183.221.
Hình P6: Kết quả đột biến lần 1.
Hình P8: Kết quả lựa chọn MTdt lên men.
Hình P9: Hình ảnh bình nhân giống cấp 1 trong lên men chọn chủng. MT MT MT MT MT MT
Hình P10: Kết quả thử hoạt tính các phân đoạn chạy cột sắc ký lần 1.
Hình P12: Đồ thị thể hiện ảnh hưởng của pH đến độ bền vững của KS. 0 5 10 15 20 25 1 3 5 7 9 11 Đ ư ờng kính v òn g v ô khuẩn(cm) pH Hoạt tính kháng sinh trên
B. subtilis
sau 1 ngày sau 6 ngày
0 5 10 15 20 25 1 3 5 7 9 11 Đường kính vòng vô khuẩ n (cm) pH Hoạt tính kháng sinh trên P.mirabilis