Pha hỗn dịch bào tử: Lấy một vòng que cấy bào tử Streptomyces 183.221
cho vào ống nghiệm chứa 10ml nước vô trùng, lắc đều, được hỗn dịch bào tử có độ pha loãng 10-1 ( định ước ). Sau đó dùng 1ml pha loãng tiếp đến nồng độ 10-6 rồi nhỏ vào đĩa Petri làm mẫu chứng.
Đột biến bằng ánh sáng UV: 9 ml còn lại của nồng độ 10-1 đổ ra đĩa Petri vô trùng. Chiếu ánh sáng UV (λ=254 nm) với khoảng cách, thời gian thích hợp (
60cm - 5 phút). Lấy ra, để vào chỗ tối 2 giờ, dùng pipet vô trùng pha loãng đến nồng độ 10-5.
Phân tán hỗn dịch bào tử sau đột biến: Dùng pipet vô trùng hút chính xác 0,1ml hỗn dịch bào tử ở ống nghiệm có độ pha loãng 10-4 và 10-5 nhỏ vào đĩa Petri chứa MT. Dùng que chang vô trùng dàn đều hỗn dịch bào tử trên bề mặt thạch, mỗi độ pha loãng làm 3 đĩa; cho các đĩa đã phân tán bào tử vào tủ ấm 280C trong 6 ngày sẽ xuất hiện các khuẩn lạc, đếm số khuẩn lạc, xác định % độ sống sót theo công thức:
% độ sống sót= x 10-6+k x 100%
Nm: số khuẩn lạc sau đột biến ở nồng độ bào tử 10-k. No: số khuẩn lạc trong mẫu chứng.
Chọn lọc ngẫu nhiên các khuẩn lạc sau đột biến, làm song song mẫu chứng. Phần trăm biến đổi hoạt tính của biến chủng thứ I được tính theo công thức:
% biến đổi hoạt tính = x 100%
Di: đường kính trung bình vòng vô khuẩn của biến chủng thứ i sau đột biến. Do: đường kính trung bình vòng vô khuẩn của mẫu chứng.
Sau đột biến, dựa vào kết quả thu được lựa chọn và giữ 3 biến chủng có % biến đổi hoạt tính (+) cao nhất dùng cho các nghiên cứu tiếp theo.