berberin clorid(%) Hàm lượng berberin(C20H18NO4) (%) 1 2,72 2,46 2 2,81 2,52 3 2,77 2,49 TB 2,77 ± 0,045 2,49 ± 0,035 Nhận xét:
Hàm lượng berberin trung bình của nguyên liệu đem khảo sát là 2,49% ±
0,035% như vậy dược liệu đem khảo sát đạt tiêu chuẩn chất lượng theo DĐVN IV (Hàm lượng berberin (C20H18NO4) không ít hơn 1,5% tính theo dược liệu khô kiệt).
Hình 3.1. Sắc ký đồ mẫu chuẩn berberin clorid
3.2. Xác định độ tan của berberin trong các dung môi chiết xuất
Pha dung dịch bão hòa của berberin clorid trong các dung môi chiết rồi tiến hành định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng (mục 2.3.1.). Kết quả được ghi trong bảng 3.2.
Bảng 3.2. Độ tan của berberin clorid trong các dung môi chiết xuất
Thời gian
Dd natri bicarbonat 0,2%
(mg/ml)
Nước vôi trong (mg/ml) Hỗn dịch vôi 1% (mg/ml) 6 giờ 2,02 2,59 4,05 8 giờ 2,04 2,63 4,08 12 giờ 2,07 2,64 4,07 Nhận xét:
Sau khoảng thời gian 6 giờ, nồng độ berberin clorid trong các dung dịch kiềm gần như đạt bão hòa, ta xác định được độ tan của berberin clorid trong các dung dịch kiềm ở nhiệt độ 25oC.
Độ tan của berberin clorid trong nước vôi cao hơn so với độ tan của berberin clorid trong dung dịch natri bicarbonat 0,2%. Độ tan của berberin clorid trong hỗn dịch vôi 1% là cao nhất (khoảng 4,08 mg/ml). Độ tan của berberin bisulfat trong nước là 1/100 (khoảng 10mg/ml) [21]. Như vậy việc chiết berberin từ thân và rễ cây vàng đắng bằng dung dịch kiềm là có thể thực hiện được.
3.3. Xác định độổn định của berberin trong các dung môi chiết xuất
Berberin kém ổn định trong kiềm mạnh [15] do đó cần phải xác định độ ổn định của berberin trong môi trường kiềm. Tiến hành xác định độ ổn định của berberin trong các dung môi chiết ở nhiệt độ phòng. Trên cơ sở đó lựa chọn dung môi chiết xuất thích hợp.
Đối với phương pháp ngâm thời gian dược liệu tiếp xúc với dung môi thường từ 3 - 5 ngày. Do đó tiến hành khảo sát độ ổn định trong khoảng thời gian 7 ngày và 30 ngày.
Tiến hành các bước như mục 2.3.3. Kết quả được ghi trong bảng 3.3. Bảng 3.3. Độ ổn định của berberin(C20H18NO4) trong các dung môi chiết xuất
Dung môi chiết Nồng độ berberin ban đầu (mg/ml) Nồng độ berberin sau 7 ngày (mg/ml) Nồng độ berberin sau 30 ngày (mg/ml) Natri bicarbonat 0,2% 0,100 0,100 0,096
Nước vôi trong 0,102 0,101 0,099
Nhận xét:
Berberin khá ổn định trong các dung môi khảo sát.
Sau khoảng thời gian 7 ngày, để các dung dịch berberin ở nhiệt độ phòng, nồng độ berberin trong các dung môi khảo sát hầu như không thay đổi.
Sau khoảng thời gian 30 ngày, để các dung dịch berberin ở nhiệt độ phòng, nồng độ berberin trong các dung dịch kiềm giảm không quá 4%. Nồng độ berberin trong nước vôi trong giảm ít hơn so với dung dịch natri bicarbonat 0,2%. Theo các tác giả Nhật Bản thì berberin clorid ổn định ở tất cả các độ pH từ 1,2 đến 9,0 và điều kiện nhiệt độ từ 25oC đến 40oC, có ít hơn 5% bị thay đổi trong khoảng thời gian 6 tháng [15] nên ta có thể dùng nước vôi, dung dịch natri
bicarbonat 0,2% làm dung môi chiết xuất berberin trong vàng đắng.
Như vậy có thể sử dụng dung dịch kiềm trên để chiết xuất berberin trong vàng đắng bằng phương pháp ngâm.
3.4. Xác định tốc độ chiết
Trong quá trình chiết xuất theo phương pháp ngâm cần xác định thời điểm rút dịch chiết hợp lý để tiết kiệm thời gian và hạn chế dịch chiết hòa tan nhiều tạp chất. Do đó cần xác định thời gian hỗn hợp chiết đạt trạng thái cân bằng.
Tiến hành các bước như mục 2.3.4.
Định lượng berberin trong các mẫu dịch chiết theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Kết quả được ghi trong bảng 3.4.
Bảng 3.4. Nồng độ berberin (C20H18NO4) trong các dung môi chiết xuất theo thời gian Dung môi Sau 4 giờ (mg/ml) Sau 8 giờ (mg/ml) Sau 12 giờ (mg/ml) Sau 24 giờ (mg/ml) Natri bicarbonat 0.2% 0,037 0,047 0,058 0,059 Nước vôi trong 0,043 0,054 0,066 0,065
Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn nồng độ berberin trong các dung môi chiết theo thời gian
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 4 8 12 24 Thời gian (giờ) N ồ ng độ (m g /m l) Nồng độ berberin trong dd NaHCO3 0,2% Nồng độ berberin trong nước vôi trong
Nồng độ berberin trong dd acid sulfuric 0,4%
Nhận xét:
Sau 12 giờ, với dung môi chiết là dung dịch kiềm, nồng độ berberin trong các dung dịch kiềm ít thay đổi, diện tích peak ổn định. Đây là thời điểm quá trình khuếch tán đạt đến cân bằng, ta cần rút hết dịch chiết lần một và chiết lần hai bằng dung môi mới. Với dung môi chiết là dung dịch acid sulfuric 0,4%, sau 12 giờ nồng độ berberin trong dịch chiết tiếp tục tăng.
Từ kết quả thu được chúng tôi lựa chọn thời gian chiết là 12 giờ với dung môi là nước vôi trong và dung dịch natri bicarbonat 0,2%. Thời gian chiết là 24 giờ với dung môi là dung dịch acid sulfuric 0,4%.