3.4.2.1 Đánh giá cảm quan
- Tính chất: màu sắc, mùi, vị, bọt khí, tủa trong nước.
- Tiến hành: Lấy 2 ml siro cho vào ống nghiệm rồi quan sát. Sau đó lấy 1 ml siro pha loãng trong 1 ml nước cất rồi nhận xét về độ tủa trong nước.
3.4.2.2 Tỷ trọng
- Nguyên tắc: Đo bằng Picnomet Tỷ trọng tương đối 20
20
d của một chất là tỷ số giữa khối lượng của một thể tích cho trước của chất đó, và khối lượng của cùng thể tích nước cất, tất cả đều cân ở 20oC.
- Tiến hành:
Cân chính xác picnomet 10 ml rỗng, khô và sạch. Đổ vào picnomet 10 ml mẫu thử là sản phẩm Siro an thần đã điều chỉnh nhiệt độ thấp hơn 20oC, chú ý không để có bọt khí. Giữ picnomet ở nhiệt độ 20oC trong khoảng 30 phút. Dùng một băng giấy lọc để thấm hết chất lỏng thừa trên vạch mức, làm khô mặt ngoài của picnomet, cân rồi tính khối lượng chất lỏng chứa trong picnomet. Tiếp đó đổ mẫu thử đi, rửa sạch picnomet, làm khô bằng cách tráng ethanol rồi tráng aceton, thổi không khí nén hoặc không khí nóng đuổi hết hơi aceton, sau đó xác định khối lượng nước cất chứa trong picnomet ở nhiệt độ 20oC như làm với mẫu thử. Tỷ số giữa khối lượng mẫu thử và khối lượng nước cất thu được là tỷ trọng 20
20
d cần xác định. Tiến hành 3 lần để lấy giá trị trung bình.
3.4.2.3 pH
- Nguyên tắc: Sử dụng máy đo pH
Trị số pH của một dung dịch được xác định bằng cách đo thế hiệu giữa điện cực chỉ thị nhạy cảm với ion hydrogen (thường là điện cực thủy tinh) và một điện cực so sánh (thí dụ điện cực calomel bão hoà).
- Tiến hành:
Chuẩn bị mẫu: Lấy 10 ml Siro cho vào becher 50 ml.
Hiệu chuẩn máy: Dùng dung dịch đệm chuẩn thứ nhất pH = 4,02, đo và chỉnh máy
để đọc được trị số pH của chuẩn tương ứng với nhiệt độ của dung dịch. Dùng một dung dịch đệm chuẩn thứ hai pH = 10,01 và dung dịch đệm chuẩn thứ ba pH = 7,41, trị số pH của đệm chuẩn thứ 3, phải không được sai khác nhiều hơn 0,05 đơn vị pH so với trị số pH = 7.
Phương pháp đo: Nhúng các điện cực vào trong dung dịch Siro an thần đã chuẩn bị
và đo trị số pH ở cùng nhiệt độ đo của các dung dịch đệm chuẩn khi hiệu chuẩn máy. Sau cùng đo lại trị số pH của dung dịch đệm chuẩn dùng để hiệu chuẩn máy và điện cực. Nếu sự khác nhau giữa lần đọc này và trị số gốc của dung dịch đệm chuẩn ấy lớn hơn 0,05 thì các phép đo phải làm lại. Tiến hành 3 lần.
3.4.2.4 Định tính alkaloid
- Nguyên tắc: Hợp chất Alkaloid sẽ tạo tủa với các thuốc thử: Thuốc thử Mayer: cho tủa vàng nhạt hoặc trắng; Wagner: tủa màu nâu; Dragendorff : tủa màu vàng cam đến đỏ.
- Tiến hành: Lấy 10 ml siro pha loãng trong 40 ml nước cất, lọc và thêm dung dịch HCl 2M đến khi có phản ứng acid. Cho vào 4 ống nghiệm mỗi ống 5 ml. Thêm thuốc thử và quan sát hiện tượng.
3.4.2.5 Định tính Tanin
- Nguyên tắc: Hợp chất Tanin sẽ tạo màu với các thuốc thử: Thuốc thử Stiasny: xuất hiện trầm hiện màu đỏ; Gelatin mặn: xuất hiện trầm hiện màu vàng nhạt; Chì acetate bão hòa: cho trầm hiện màu vàng nhạt; Dung dịch FeCl3 5 %: dung dịch xuất hiện màu xanh đen hay xanh rêu.
- Tiến hành: Lấy 5 ml siro an thần hòa tan trong 15 ml nước cất. Cho vào 5 ống, mỗi ống 2 ml. Rồi thêm thuốc thử như trên và quan sát hiện tượng.
3.4.2.6 Định tính steroid và triterpenoid
- Nguyên tắc: Hợp chất steroid và triterpenoid sẽ tạo dung dịch màu với các thuốc thử. Thuốc thử Liebermann – Burchard: dung dịch đổi thành màu xanh dương, lục, cam hoặc đỏ và các màu này bền không đổi; Salkowski: dung dịch đổi thành màu đỏ, xanh, xanh – tím.
- Tiến hành: Hòa tan 5 ml siro vào 30 ml dung môi cloroform, cho vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 3 ml, đánh số thứ tự và lần lượt thử với các thuốc thử trên.
3.4.2.7 Định tính saponin
- Nguyên tắc: Tính tạo bọt là một tính chất đặc trưng của saponin, căn cứ vào tính tạo bọt để xác định sự hiện diện của saponin.
- Tiến hành: Lấy 5 ml siro pha loãng trong 95 ml nước cất. Lấy 10 ống nghiệm có chiều cao 16 cm đường kính 16 mm, cho vào ống nghiệm lần lượt 1, 2, 3,…, 10 ml dung dịch. Thêm nước cất vào mỗi ống cho đủ 10 ml. Bịt miệng ống nghiệm, lắc theo chiều dọc của ống nghiệm trong 15 giây, mỗi giây lắc hai lần. Để yên 15 phút đo chiều cao các cột bọt trong mỗi ống nghiệm.
+ Nếu chiều cao của cột bọt của tất cả các ống đều thấp dưới 1 cm: đánh giá chỉ số bọt dưới 100. Tức không có saponin.
+ Nếu chiều cao cột bọt 1 cm là ống số 1 hoặc số 2, cần pha loãng dung dịch đi 10 lần và thực hiện trở lại.
+ Nếu chiều cao của cột bọt của tất cả các ống đều cao hơn 1 cm, cần pha loãng và thực hiện lại.
3.4.2.8 Độ nhiễm khuẩn
- Yêu cầu của sản phẩm:
+ Tổng số vi khuẩn hiếu khí sống lại được không quá 104 trong 1 ml. + Tổng số Enterobacteria không quá 500 trong 1 ml.
+ Nấm và mốc không quá 100 trong 1 ml. + Không được có Salmonella trong 1 ml.
+ Mẫu không có Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. trong 1 ml.
- Tiến hành:
Gửi mẫu Siro an thần đến Công Ty Cp Dược Hậu Giang.
3.4.3 Thử nghiệm các yêu cầu kỹ thuật để xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho
Thuốc giọt trợ tim
3.4.3.1 Đánh giá cảm quan
- Tính chất: màu sắc, mùi, tủa trong nước, độ trong.
- Tiến hành: Lấy 5 ml thuốc giọt trợ tim cho vào becher rồi quan sát. Sau đó hòa tan 2 ml thuốc trong 2 ml nước cất rồi nhận xét về độ tủa trong nước. Lấy 3 ml chế phẩm vào ống nghiệm sạch, soi dưới ánh sáng thường.
3.4.3.2 pH
- Nguyên tắc: Sử dụng máy đo pH
Trị số pH của một dung dịch được xác định bằng cách đo thế hiệu giữa điện cực chỉ thị nhạy cảm với ion hydrogen (thường là điện cực thủy tinh) và một điện cực so sánh (thí dụ điện cực calomel bão hoà).
- Tiến hành:
Chuẩn bị mẫu: Lấy 10 ml Thuốc giọt trợ tim cho vào becher 50 ml.
Hiệu chuẩn máy: Dùng dung dịch đệm chuẩn thứ nhất pH = 4,02, đo và chỉnh máy
dung dịch đệm chuẩn thứ hai pH = 10,01 và dung dịch đệm chuẩn thứ ba pH = 7,41, trị số pH của đệm chuẩn thứ 3, phải không được sai khác nhiều hơn 0,05 đơn vị pH so với trị số pH = 7.
Phương pháp đo: Nhúng các điện cực vào trong dung dịch Thuốc giọt trợ tim đã chuẩn bị và đo trị số pH ở cùng nhiệt độ đo của các dung dịch đệm chuẩn khi hiệu chuẩn máy. Sau cùng đo lại trị số pH của dung dịch đệm chuẩn dùng để hiệu chuẩn máy và điện cực. Nếu sự khác nhau giữa lần đọc này và trị số gốc của dung dịch đệm chuẩn ấy lớn hơn 0,05 thì các phép đo phải làm lại. Tiến hành 3 lần.
3.4.3.3 Tỷ trọng
- Nguyên tắc: Đo bằng Picnomet Tỷ trọng tương đối 20
20
d của một chất là tỷ số giữa khối lượng của một thể tích cho trước của chất đó, và khối lượng của cùng thể tích nước cất, tất cả đều cân ở 20oC.
- Tiến hành:
Cân chính xác picnomet 10 ml rỗng, khô và sạch. Đổ vào picnomet 10 ml mẫu thử là sản phẩm Thuốc giọt trợ tim đã điều chỉnh nhiệt độ thấp hơn 20oC, chú ý không để có bọt khí. Giữ picnomet ở nhiệt độ 20oC trong khoảng 30 phút. Dùng một băng giấy lọc để thấm hết chất lỏng thừa trên vạch mức, làm khô mặt ngoài của picnomet, cân rồi tính khối lượng chất lỏng chứa trong picnomet. Tiếp đó đổ mẫu thử đi, rửa sạch picnomet, làm khô bằng cách tráng ethanol rồi tráng aceton, thổi không khí nén hoặc không khí nóng đuổi hết hơi aceton, sau đó xác định khối lượng nước cất chứa trong picnomet ở nhiệt độ 20oC như làm với mẫu thử. Tỷ số giữa khối lượng mẫu thử và khối lượng nước cất thu được là tỷ trọng
20 20
d cần xác định. Tiến hành 3 lần để lấy giá trị trung bình.
3.4.3.4 Định tính alkaloid
- Nguyên tắc: Hợp chất Alkaloid sẽ tạo tủa với các thuốc thử: Thuốc thử Mayer: cho tủa vàng nhạt hoặc trắng; Wagner: tủa màu nâu; Dragendorff : tủa màu vàng cam đến đỏ.
- Tiến hành: Lấy 5 ml dung dịch thuốc pha với 15 ml nước cất, lọc và thêm dung dịch HCl 2M đến khi có phản ứng acid. Cho vào 4 ống nghiệm mỗi ống 5 ml. Thêm thuốc thử và quan sát hiện tượng.
3.4.3.5 Định tính flavonoid
Ví dụ: OH HO OH OH O O OH HO OH OH O
Quercetin Clorur cyaniding (màu đỏ). Nếu sản phẩm có chứa flavon, flavanon, flavonol, flavononol, xanthon dung dịch sẽ có màu cam, đỏ hoặc tím. Nếu sản phẩm có chứa isoflavon, isoflavanon, auron dung dịch không đổi màu.
- Tiến hành:
+ TN1: Lấy 3,5 ml thuốc giọt trợ tim, pha với 6 ml methanol. Chia vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml, đánh số 1 và 2. Ống 1 làm đối chứng, ống 2 thêm 1ml ancol isoamyl, 0,5ml HCl đậm đặc, 3 – 5 hạt Mg. Quan sát hiện tượng.
+ TN2: Lấy ống 1 của thí nghiệm trên + 5ml methanol, rồi tiến hành như trên và quan sát hiện tượng.
3.4.3.6 Định tính saponin
- Nguyên tắc: Tính tạo bọt là một tính chất đặc trưng của saponin, căn cứ vào tính tạo bọt để xác định sự hiện diện của saponin.
- Tiến hành: Lấy 5 ml thuốc giọt trợ tim pha loãng trong 95 ml nước cất. Lấy 10 ống nghiệm có chiều cao 16 cm đường kính 16 mm, cho vào ống nghiệm lần lượt 1, 2, 3,…, 10 ml dung dịch. Thêm nước cất vào mỗi ống cho đủ 10 ml. Bịt miệng ống nghiệm, lắc theo chiều dọc của ống nghiệm trong 15 giây, mỗi giây lắc hai lần. Để yên 15 phút đo chiều cao các cột bọt.
+ Nếu chiều cao của cột bọt của tất cả các ống đều thấp dưới 1 cm: đánh giá chỉ số bọt dưới 100. Tức không có saponin.
+ Nếu chiều cao cột bọt 1 cm là ống số 1 hoặc số 2, cần pha loãng dung dịch đi 10 lần và thực hiện trở lại.
+ Nếu chiều cao của cột bọt của tất cả các ống đều cao hơn 1 cm, cần pha loãng và thực hiện lại.
Mg + HCl
3.4.3.7 Độ nhiễm khuẩn
- Yêu cầu của sản phẩm:
+ Tổng số vi khuẩn hiếu khí sống lại được không quá 104 trong 1 ml. + Tổng số Enterobacteria không quá 500 trong 1 ml.
+ Nấm và mốc không quá 100 trong 1 ml. + Không được có Salmonella trong 1 ml.
+ Mẫu không có Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. trong 1 ml.
- Tiến hành:
Gửi mẫu Thuốc giọt trợ tim đến Công Ty Cp Dược Hậu Giang.
3.4.3.8 Định tính Natri camphosulfonat
- Nguyên tắc: Dựa vào tính chất vật lý: có mùi long não nhẹ và tính chất hóa học: tạo tủa với Kẽm uranyl acetate.
- Tiến hành:
+ Pha acid acetic 12,5 %. Hòa tan 0,1 g uranyl acetate và 0,1 g kẽm acetate (có thể thay bằng Mg(CH3COO)2) vào trong 1 ml acid acetic 12,5 % và 3 ml nước cất (dung dịch B).
+ Lấy 10ml chế phẩm, bốc hơi trên cách thủy đến khô (khoảng 30 phút), cho vào cắn một mảnh nhỏ NaOH hạt (TT), nung nóng nhẹ, hơi bốc ra có mùi long não.
+ Lấy 1ml chế phẩm pha vào 5 ml nước cất, acid hóa bằng acid acetic loãng. Cho vào 5 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml. Đánh số thứ tự từ 1 đến 5.
Bảng 3.1 Thể tích chế phẩm định tính Natri camphosulfonat STT VH O2 thêm vào (ml) Vdd B (ml) 1 2 1 2 3 0,5 3 4 0,5 4 5 1 5 10 1
3.4.3.9 Định lượng Natri camphosulfonat
- Phương pháp:
+ Xác định hệ số hiệu chỉnh K của NaOH 0,1 N.
+ Sử dụng phương pháp sắc ký trao đổi ion để tiến hành định lượng.
+ Thuốc thử và dụng cụ: C2H2O4.2H2O, phenolphthalein, nhựa cationit acid mạnh, NaOH 0,1 N; cột sắc ký trao đổi ion.
- Cơ chế quá trình sắc ký trao đổi ion:
Khi cho chế phẩm qua cột nhựa Cationit acid mạnh (RSO3H), thì ion Na+ (C10H15O4SNa) bị hạt nhựa giữ lại vì xảy ra quá trình trao đổi ion H+ thành ion Na+. Do đó dung dịch chảy ra khỏi cột là môi trường acid. Ta tiến hành chuẩn độ dung dịch đó bằng NaOH 0,1 N sẽ tính được hàm lượng Natri camphosulfonat.
- Tiến hành:
* Hệ số hiệu chỉnh:
Tiến hành chuẩn độ dung dịch NaOH 0,1 N sau khi pha bằng dung dịch acid oxalic.
* Tiến hành định lượng Natri camphosulfonat:
+ Chuẩn bị nhựa và cột trao đổi ion.
+ Lấy khoảng 5g nhựa cationit, rửa 2 – 3 lần với nước, rồi ngâm 4 – 5 giờ trong nước để cho các hạt nhựa nở ra.
+ Cố định buret dài khoảng 15 – 25 cm, với đường kính trong cột khoảng 1 – 2 cm. + Lót ít bông dày khoảng 0.5 – 1 cm ở phía dưới trên chỗ thắt của buret. Đổ nước vào khoảng 1/2 chiều cao, khi đổ nhựa vào thì mở khóa vòi cho nước chảy ra. (Chú ý không để cho các bọt khí bị giữ lại giữa các kẻ của hạt nhựa. Khi chiều cao của cột nhựa đạt yêu cầu (8 – 10 cm), cho một lớp bông mỏng lên trên và vẫn giữ mực nước luôn cao hơn 4 – 5 cm so với lớp nhựa).
+ Sau khi cho nhựa vào cột, xử lý bằng HCl 4%, cho chảy với tốc độ 20 – 25 giọt / phút. Rửa như vậy cho đến khi dung dịch chảy ra không có phản ứng với dung dịch amoni sulfocyanid 5% hay kali ferocyanid 5%. Tiếp theo rửa cột với nước cho tới khi nước rửa không còn phản ứng với ion clorid. (Chú ý luôn giữ mực nước cao hơn 4 – 5 cm so với lớp nhựa. Đậy cột bằng mặt kính đồng hồ hay ống nghiệm lớn). + Kiểm tra độ trung tính của nước rửa:
Lấy khoảng 150 ml nước rửa, thêm 2 giọt dung dịch phenolphthalein (TT), chuẩn bằng NaOH 0,1 N (CĐ) tới màu hồng. Chỉ được dùng không quá 0,05 ml dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ), nếu nhiều hơn, phải tiếp tục rửa lại cho sạch.
+ Lấy 5,0 ml chế phẩm cho vào cốc, thêm 10 – 20 ml nước. Rót dung dịch thu được vào cột trao đổi cation, cho chảy với tốc độ 0,6 – 0,7 ml / phút và hứng vào bình nón 250 ml. Tráng rửa cốc bằng 10 – 20 ml nước, đổ vào cột, rửa với tốc độ như trên. Tráng lại nhiều lần với nước, đổ vào cột, tiếp tục rửa với tốc độ 3 ml / phút, cho đến khi hứng được khoảng 200 ml (bình 1).
Chú ý: Phải giữ mực nước trên cột, không để cho bọt khí lọt vào lớp nhựa.
+ Kiểm tra: Cho nước vào rửa cột, hứng dịch rửa bằng bình nón khác (bình 2) đến khi thu được khoảng 200 ml. Thêm 1 – 2 giọt dung dịch phenolphthalein (TT), chuẩn độ bằng dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ) tới màu hồng. Lượng dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ) đã dùng khoảng 0,1 – 0,2 ml (tức đã rửa hết Natri camphosulfonat).
Trường hợp 1: Kết quả kiểm tra bình 2 đạt
Cho 2 – 3 giọt dung dịch phenolphthalein (TT) vào bình 1, định lượng bằng dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ) tới màu hồng.
Mỗi 1 ml dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ) # 0,02543 g C10H15O4SNa. Hàm lượng Natri camphosulfonat, C10H15O4SNa trong 100 ml chế phẩm.
. .0, 02543.100 ( )
5
n k
X g
K: Hệ số hiệu chỉnh dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ). n: Thể tích dung dịch NaOH 0,1 N (CĐ).
Trường hợp 2: Kết quả kiểm tra bình 2 không đạt (chưa rửa hết Natri camphosulfonat).
Tiến hành định lượng lại trên 5,0 ml chế phẩm khác, với tốc độ nước chảy chậm hơn (1 – 1,2 ml / phút) đến khi hứng được khoảng 200 ml dung dịch, rồ tiếp tục định lượng như trên.
CHƯƠNG 4
KẾT QUẢ
4.1 Trà hòa tan an thần
- Đánh giá cảm quan: Pha 5 g Trà hòa tan với 50 ml nước nóng. Dung dịch Trà có màu nâu vàng, mùi dược liệu bay ra.
- pH dung dịch trên đo bằng máy đo pH TDS – OAKTON: Bảng 4.2