Hóa chất
+ Dung dịch A
(1) 12 gram (NH4)6MoO24.4H2O (amonium molybdate) + 250 ml H2O (2) 02908 gram KsbOC4H2O6 (potassium antimonyl tartrate) + 100 ml H2O (3) Đong 140 ml H2SO4 đậm đặc và thêm H2O vào từ từ cho đủ 1 lít
(4) Cho (1) và (2) vào (3) sau đó thêm H2O vào cho đủ 2 lít
+ Dung dịch B
1,05 gram acid ascorbic + 200 ml dung dịch A
Thao tác
Xây dựng đường chuẩn P2O5: (Cao Ngọc Điệp, 2011) - Lấy 6 ống nghiệm 20 ml được đánh số theo thứ tự 0 đến 5.
- Cho vào mỗi ống nghiệm 5 ml nước khử khoáng, thêm lần lượt theo thứ tự trên 0,0 - 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 ml dung dịch lân chuẩn có nồng độ 1 mg/l P2O5. - Thêm vào mỗi ống 4 ml dung dịch B và 3,5 - 3,0 - 2,5 - 2,0 - 1,5 - 1,0 ml nước lần lượt vào các ống theo thứ tự trên, trộn đều bằng máy khuấy.
- Ống số 0 là đối chứng âm và đường chuẩn với nồng độ các ống theo thứ tự là 0,0 - 0,5 - 1,0 - 1,5 - 2,0 - 2,5 mg/l P2O5.
Xử lý mẫu dịch nuôi cấy và tiến hành định lượng: (Cao Ngọc Điệp, 2011) - Thời điểm tiến hành thu dịch nuôi cấy để định lượng lân hòa tan là ngày 5, 10, 15 và 20.
- Rút 2 ml dịch nuôi cấy cho vào eppendorf, ly tâm với tốc độ 12.000 vòng/phút, trong 5 phút.
- Hút 0,5 ml dịch trong cho vào ống nghiệm chứa 5 ml nước khử khoáng, thêm 4 ml dung dịch B và 3 ml nước vào mỗi ống, trộn đều bằng máy khuấy.
- Để ổn định 15 - 20 phút tại nhiệt độ phòng rồi tiến hành đo lượng lân hòa tan được bằng phương pháp so màu ở bước sóng 880 nm (OD 880nm).