Khoảng tin cậy của phép xác định nồng độ được tính theo công thức:
P,k
t .S X ± ε = X ±
n
Với tP, k là hệ số phân bố chuẩn Student ứng với xác suất P và bậc tự do k được tra trong bảng (t0,95; 3 = 3,18; t0,95; 4 = 2,78; t0,95; 5 = 2,57 ); X
trung b ; S là độ lệch chuẩn, n là số phép đo.
2.4. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất
2.4.1. Thiết bị
- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Hitachi L-2000 với detector UV-VIS
- thuộc – Đại học Thái Nguyên.
- – thuộc
– Đại học Thái Nguyên, có khả năng quét phổ trong khoảng bước sóng 190nm – 900 nm, có kết nối máy tính.
- Bộ cuvet thạch anh.
- Cân điện tử có độ chính xác 0,0001g. - Bếp cách thủy.
- Máy rung siêu âm. - Máy đo pH.
2.4.2. Dụng cụ
- Pipet các loại: 1 mL; 2 mL; 5 mL; 10 mL; 20 mL; 25 mL.
- Bình định mức dung dịch: 10 mL; 25 mL; 50 mL; 100 mL; 250 mL; 500 mL; 1000 mL.
- Cốc thủy tinh, phễu thủy tinh, ống nghiệm...
- Chương trình lọc Kalman tính toán đồng thời nồng độ các cấu tử [18,19].
2.4.3. Hóa chất
- HCl, H2SO4, HNO3, H3PO4, KH2PO4,... dùng để pha chế các dung dịch đều thuộc loại tinh khiết của Merck.
- Nước cất 2 lần
- Chất chuẩn acetaminophen và codein phot phat nguyên chất do viện kiểm nghiệm dược sản xuất.
- Thuốc viên Actadol codeine sản xuất bởi Công ty TNHH một thành viên dược phẩm và sinh học y tế Quận Tân Phú, TP. Hồ Chí Minh; Số lô: III- 18; Ngày sản xuất: 08/3/2014; Hạn sử dụng: 08/3/2017.
2.4.4. Chế phẩm actadol codeine Thành Phần:
Mỗi viên nén chứa: Acetaminophen : 500mg
Codein phosphat: 8mg
Hình 2.1. Chế phẩm thuốc Actadol codein
2.5. Chuẩn bị các dung
, chúng tôi đã sử dụng các dung môi sau: - Dung dịch đệm KH2PO4.
- Dung dịch pha động.
- Dung dịch HCl 10-1M; 10-2M; 10-3M.
- Dung dịch H2SO4 5.10-2M; 5.10-3M; 5. 10-4M. - Dung dịch HNO3 10-1M; 10-2M; 10-3M.
Dung dịch đệm KH2PO4 được chuẩn bị bằng cách Hòa tan 2,04 g kali dihydrophosphat trong 950 mL nước cất 2 lần. Thêm 1mL triethylamin, điều chỉnh về pH = 2,5 bằng axit phosphoric pha loãng với nước cất 2 lần định mức thành 1000 mL và trộn đều.
Dung dịch pha động chuẩn bị bằng cách lấy dung dich đệm KH2PO4 có lẫn triethylamin và acetonitrile ở các tỷ lệ về thể tích từ 85:15 đến 95:5.
Lấy 41,8 mL
500 mL thu được dung dịch HCl 0,001M.
Lấy 5,5 mL dung dịch H2SO4 97% 100 mL thu được dung dịch H2SO4
Lấy 7 mL dung dịch HNO3
100 mL thu được dung dịch HNO3 3
0,001M..
Các dung dịch đã được kiểm tra lại pH bằng phương pháp chuẩn độ axit- Bazơ
Chƣơng 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Phƣơng pháp HPLC