3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.1.Phương pháp xác ựịnh thành phần nấm gây hại trên hạt giống lạc L14
Phương pháp chia mẫu: mẫu hạt giống ựược rải ựều trên mặt phẳng theo hình tròn, chia mặt phẳng thành bốn phần ựều nhau. Lấy mỗi phần một lượng nhất ựịnh sau ựó trộn ựều.
Phương pháp giám ựịnh bệnh hại trên hạt giống bằng phương pháp giấy thấm: 40 ựĩa mỗi ựĩa ựặt 10 hạt trên giấy thấm ựã ựược làm ẩm bằng nước cất vô trùng trong ựĩa Petri ựã ựược khử trùng. Sau ựó ựặt chúng trong phòng ủ ựảm bảo 12 giờ sáng, 12 giờ tối ở nhiệt ựộ 220C Ờ 250C, sau 7 ngày kiểm tra mẫu.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ hạt bị bệnh, tỷ lệ hạt nảy mầm, tỷ lệ hạt thối, tỷ lệ mầm dị dạng, tỷ lệ hạt bình thường.
3.4.2. Phương pháp xác ựịnh thành phần nấm gây bệnh trên cây lạc L14 vụ xuân 2012 tại huyện Thường Tắn, Hà Nội
Phương pháp phân lập và giám ựịnh nấm gây bệnh.
Theo phương pháp nghiên cứu bệnh cây do Vũ Khắc Nhượng và Hà Minh Trung dịch (1983) [20]. Sau khi thu thập mẫu bệnh có triệu chứng ựiển hình, tiến hành rửa sạch mẫu bệnh dưới vòi nước, sau ựó rửa lại bằng nước cất vô trùng và dùng giấy thấm vô trùng làm khô mẫu bệnh. Cắt mô gốc thân cây bệnh thành các mảnh nhỏ kắch thước 1 Ờ 2mm x 1 Ờ 2mm (ranh giới giữa mô bệnh và mô cây khỏe), sát trùng bằng cồn 700 trong 3 Ờ 5 giây, thấm khô bằng giấy thấm vô trùng. Dùng que cấy ựã khử trùng cấy mô bệnh vào môi trường WA và ựể ở ựiều kiện nhiệt ựộ thắch hợp (250C Ờ 280C). Sau khi sợi nấm mọc cách mô bệnh 2cm, dùng que cấy ựã khử trùng cắt phần ựầu sợi nấm cấy chuyển sang môi trường PGA, thực hiện như vậy 5 Ờ 6 lần cho ựến khi ựược nấm thuần (Isolate). Sau ựó cấy nấm thuần vào ống nghiệm có thạch nghiêng, giữ nguồn nấm ựể tiếp tục nghiên cứu.
để giám ựịnh nấm căn cứ vào tài liệu ỘDiagnostic manual for plant disease in Viet NamỢ của tác giả Lester W. Burgess, Timothy E. Knight len tesoriero, Phan Thúy Hiền xuất bản năm 2008 [57], chúng tôi dùng kắnh hiển vi ựể xác ựịnh nấm bệnh dựa vào ựặc ựiểm hình thái và tiến hành lây bệnh nhân tạo nhằm xác ựịnh chắnh xác nguyên nhân gây bệnh.