THỰC NH ỆM VÀ PHƯƠN PHÁP NH ÊN CỨU 2.1 N u n liệu, ất v t iết bị n i n ứu
2.3.2. Phân lập các chất sạch từ cặn chiết n-hexan
Lấy 8 gam cặn n-hexan hòa tan hoàn toàn vào dung môi n-hexan và EtOAc trong bình cầu. Chấm bản mỏng để tìm hệ dung môi thích hợp chạy cột, thêm vào khoảng 40 gam silica gel và quay cất dưới áp suất thấp đến khô hoàn toàn để chất gắn đều lên silica gel. Làm mịn phần silica gel đã gắn mẫu bằng cối và chày sứ để nạp vào sắc kí cột.
Chuẩn ị cột sắc kí
Cho dung môi n-hexan và 200 gam silica gel vào ca nhựa, khấy đều để đuổi hết bọt khí.
Cho mẩu bông nhỏ vào đáy cột (để tránh silica gel lọt xuống bình hứng). Silica gel được cho vào cột ở dạng sệt.
Đưa mẫu l n cột
Mẫu khô sau khi đính đều lên silica gel được cho vào cột sắc kí từ từ thông qua phễu sau khi đã khóa cột. Chú ý khi cho mẫu vào cột theo phương pháp khô thì lượng dung môi phải vừa đủ, không nhiều quá; lượng mẫu phải dàn trải đều một lớp mỏng trên bề mặt silica gel trong cột; mẫu phải thấm ướt đều dung môi, không có bọt khí.
Tiến hành chạy cột
Tiến hành chạy cột silica gel với dung môi n-hexan 100%, sau đó chạy với hệ dung môi n-hexan/EtOAc tăng dần độ phân cực (n-hexan 100% đến n- hexan /EtOAc = 1/1), thu được 13 phân đoạn kí hiệu từ PĐ 1.1 đến PĐ 1.13, quá trình phân lập các phân đoạn từ cao chiết n-hexan của cành và lá cây Quao nước trình bày ở sơ đồ 2.1. Sau đó tiến hành chấm bản mỏng các phân đoạn thu được.
20
Phân đoạn PĐ 1.7 có chất rắn kết tinh, dựa vào bản mỏng và so sánh với mẫu β-sitosterol có sẵn cho thấy chất này có cùng Rf và màu sắc với chất chuẩn và được ký hiệu là QNL 1.7.
Phân đoạn PĐ 1.10 có khả năng tách được chất sạch. Tiếp tục chạy cột silica gel phân đoạn nhỏ PĐ 1.10 (4,34 g) với hệ dung môi n- hexan/EtOAc (98/2 đến 1/1). Kết quả thu được 22 phân đoạn từ PĐ 1.10.1
đến PĐ 1.10.22. Phân đoạn PĐ 1.10.19 (0,237 g) được tiến hành chạy cột
Sephadex thu được chất rắn màu trắng kết tinh ở phân đoạn thứ 11. Chất rắn được rửa nhiều lần bằng metanol lạnh thu được tinh thể hình kim màu trắng ký hiệu là QNL 1.10.19.
21
22 * C ất sạ QNL 1.7 (β-sitosterol)