khồng hồn tồn phù hợp với một số phép đo khác về POL. Cĩ những phương pháp đặc hiệu cĩ thể xác định được các loại LOOH khác nhau, dựa trên việc tách các loại lipid của các hydro peroxìde từ dịch chiết lipid của huyết thanh, khi đùng sắc ký lỏng hiệu năng cao và đo huỳnh quang trong quá trình chúng phân huỷ cĩ mặt luminol, isoluminoỉ. Cách nhận fâ cấc LOOH bầng cắeh sồ sánh Vối những chất chuẩn. Kỹ thuật xấc định nầy nhìn chung mất nhiều thịi gian và khơng tiện lợi lắm. b) Định lượng ílavonoid: [36]
IsoOavon cĩ thể ức chế đáng kể quá trình POL ở microsome gan chuột được kích thích bởi phức hợp Fe2+-ADP-NaDPH. Bằng phương pháp này để định lượng hoạt tính chống oxy hố, Ruiz-Larrea và cộng sụ (1997) đã xác định thứ tự hoạt tính chống oxy hố của một sổ isoAavon như sau: genislein > daidzein = genistin = biochanin A = daidzin > íbrmononetin = ononin. Tuy nhiên, cũng bằng phương pháp trên nhưng định lương nhĩm hợp chất thiobarbiluric (TBARS), Michell và cộng sự (1998) chi ra rằng genistein và daìdzein chỉ cĩ hoạt tính chống oxy hố yếu. Dịch chiết từ đậu nành giàu isorìavon cĩ Thể ức chế sự hình thành quá trình POL ở lớp phospholipid màng não bị được kích thích bởi Fe37vitamin c.
2.2.22- Đo các ankan bay hơi: [14]
Phép đo các hydrocacbon bay hơi ở hơi thở ra, do sự phân cắt ở vị trí Ịì
Phương pháp cĩ độ nhạy cao, các mẫu đo được lạp lại từ cùng một cá thể riêng lẻ. Hơi thở dẫn đi qua một cột chất hấp phụ ờ -100°c. Sau đĩ giải hấp và đo bằng sắc ký khí cĩ detector ion hố bàng ngọn lửa,
Khơng khí hít vào phải tinh chế thật sạch* đe tránh lẫn các khí hỵđra
cacbon, do khí thải động cơ quanh con người lẫn vào. Đây cũng là trở ngại khơng thuận tiện cho người bệnh.
22.23- Đo MDA-các chất phàn ứng được với acicẦ thiobarbituric [8]
Đây ià phương pháp phổ thơng và sớm nhất, được dùng như là một chỉ thị che POL vầ hơạí tính gốc íự dỡ írỡrìg mẫil sinh hộc. MDA Íĩhaiímyỉ dialdehyd) là một trong những sản phẩm cuối cùng của quá trình POL, tạo phức mầu hồng bền với acid thiobarbíturíc, độ hấp thụ cực đại của phức ở bước sĩng 532 nm.
Hoạt tính chống oxy hố in vivo là tỷ lệ phần trăm lượng MDA giảm đi ở mẫu thử so với mảu đối chứng.
Cách xẩc đỊnh hoạt tính chống oxy hoẩ ỉn vỉvo mấ một sổ tai íỉệu dã làm thường tiến hành như sau:
Chuột Swiss cĩ trọng lượng 18-20 gam (tương ứng 40-45 ngày tuổi), thuần chúng, được nuơi trong cùng điều kiện. Sau khi đã đưa những chất thử (uống, tiêm những chất cần nghiên cứu) đạt thời gian cần thiết thì giết chuột thật nhanh. Lấy tổ chức cẩn khao sát (gan, não...) rửa sạch máu bằng dung dịch nước muối sinh ỉý và thấm khơ bàng giấy lọc. Cân một lượng tổ chức (gan, não...) tiến hành làm đồng nhất (làm homogcnat hay tạo dịch đồng thể) với đệm Tris G,04M; pH 7,4 theo tỷ lệ (lg/50ml). Đem ủ dịch đổng thể trơn ở nhiệt độ 37°c trong một khoảng thời gian 15 đến 20 phút. Sau đĩ thêm vào một lượng acid trichloacetic 30% theo tỷ lệ (1 mỉ acid trichloacetic : 5 ml đệm tris), lắc kỹ, tách tủa. Lấy 2 ml dịch trong, thêm vào đĩ 0,2 ml dung dịch HC1
100°c trong 15 phút. Để nguội đến nhiệt độ phịng, đọ quang ở bước
sĩng /L,= 532 nm-
Lượng MDA được biểu thị thành nanomol vớì hệ số tát mol
s = Ì M lỡ=5M=lcmsl. Cồng thức tính MBẦ:
2.22.4- Đo các aỉdehyd khác MDA [14]