Gen OsHKT1đƣợc nhân bản bằng phƣơng pháp PCR sử dụng 4 cặp mồi đặc hiệu. Kết quả sản phẩm PCR đƣợc điện di kiểm tra trên gel agarose. Kết quả sản phẩm phản ứng PCR sử dụng cặp mồi 1 đƣợc trình bày ở hình 23.
35
Hình 23. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 1
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb; Gel Agarose 1%
Kết quả điện di cho thấy các băng thu đƣợc sáng , khá gọn, đồng đều nhau, đúng kích thƣớc là 499bp và không xuất hiện băng phụ. Như vậy, đoạn
đầu của exon 1 gen OsHKT1đã được nhân bản thành công.
Đoạn tiếp theo của exon 1 được nhân bản sử dụng cặp mồi 2. Kết quả
điện di sản phẩm PCR được trình bày ở hình 24.
Hình 24. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 2
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb; Gel Agarose 1%
M 2
36
Kết quả điện di cho thấy các băng thu đƣợc sáng , khá gọn, đồng đều nhau, đúng kích thƣớc là 828bp và không xuất hiện băng phụ. Như vậy, đoạn thứ hai của exon 1 gen OsHKT1 đã đƣợc nhân bản thành công.
Đoạn còn lại của exon 1 và exon 2 được nhân bản bằng phản ứng PCR sử dụng cặp mồi 3. Kết quả điện di sản phẩm PCR được trình bày ở hình 25
Hình 25. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 3
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu; 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb;Gel Agarose 1%.
Điện di kiểm tra sản phẩm PCR trên gel agarose thu đƣợc các băng đúng kích thƣớc là 603bp, cũng không xuất hiện băng phụ, các mẫu có băng sáng rõ. Nhƣ vậy đã nhân bản thành công cả 2 đoạn exon 1 và exon 2 gen OsHKT 1.
Đoạn exon thứ 3 đƣợc nhân bản bằng phƣơng pháp PCR sử dụng cặp mồi 4. Kết quả điện di sản phẩm PCR được trình bày ở hình 26
60 3 bp
668 bp
37
Hình 26. Điện di sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4
1.Nếp nõn tre; 2.Chiêm cũ; 3.Nếp vải; 4.Ré nước; 5.Hom râu, 6.Nếp ốc; 7.Ngoi;8. Dâu Ấn độ; 9. Nếp đèo đàng M. Maker 1kb; Gel Agarose 1%.
Điện di kiểm tra sản phẩm PCR trên gel agarose thu đƣợc các băng đúng kích thƣớc là 668bp, cũng không xuất hiện băng phụ, các mẫu có băng sáng rõ. Như vậy, gen OsHKT1đã được nhân bản thành công.
3.5.Giải trình tự gen OsHKT1 ở 8 giống lúa.
Sản phẩm PCR sau đó đƣợc tinh sạch sử dụng Kit thôi gel Gene JET PCR Purification Kit #0701 của hãng Thermo scientific và đƣợc gửi đi giải trình tự. Một phần kết quả giải trình tự đối với giống Nếp nõn tre đƣợc trình bày ở hình sau:
Hình 27. Hình ảnh cho thấy một phần kết quả giải trình tự đối với mẫu Nếp nõn tre sử dụng cặp mồi 3