- Sau khi phun quan sát sự biến đổi bên ngoài liên tục trong 6, 12,24 h; sau đó theo dõi hàng ngày, 1 lần/ngày cho đến khi nấm bao phủ và hình thành bào tử trên cơ
2.3.5.Phương pháp xác định nồng độ bào tử
Nồng độ bào tử được xác định trên buồng đếm hồng cầu.
Đó là 1 lam kính dày (kích thước 7 cm x 3 cm x 0,5 cm), có 4 rãnh ngang và 1 rãnh dọc, có 225 ô vuông lớn. Trong đó có 25 ô lớn chính giữa được chia thành các ô vuông nhỏ (1 ô lớn có 16 ô nhỏ). Kích thước ô nhỏ như sau: mỗi cạnh bằng 1/20 mm và sâu 1/10 mm. Thể tích của 1 ô vuông nhỏ là: 1/20 x 1/20 x 1/10 = 1/4000 (mm3).
• Phương pháp đếm
Môi trường PDA lấy phần khuẩn lạc nấm cho vào 1 cốc đong nhỏ với 10ml nước cất 2 lần. Dùng đũa thủy tinh khuấy bào tử hòa tan trong nước.
Môi trường lên men rắn, xốp: Lấy 1g hỗn hợp cơ chất môi trường cho vào cốc đong nhỏ với 10ml nước cất 2 lần. Dùng đũa thủy tinh đánh đều.
• Phương pháp pha loãng dịch bào tử để đếm
Lấy ra 1 ml dịch bào tử ban đầu cho vào một cốc chứa 9 ml nước cất khuấy đều, lần pha loãng thứ 2 lấy 1 ml dịch nấm ở lần pha thứ nhất cho vào 9 ml nước cất, tiến hành như thế cho đến lúc đạt độ pha loãng cần thiết.
Dùng lưới lọc mịn (tấm lưới lọc của Nhật Bản) lọc hỗn hợp dung dịch vừa pha chế để đảm bảo chỉ có bào tử được lọt qua. Nhỏ vào dịch lọc 1 - 2 giọt hỗn hợp gồm Tween 80 và cồn 960 với tỷ lệ 1:1, khuấy đều. Nhỏ 1 giọt bào tử đã pha loãng lên buồng đếm, đậy lamen lên, dùng giấy thấm để thấm dịch thừa xung quanh.
Đặt buồng đếm lên kính hiển vi điều chỉnh kính hiển vi với độ phóng đại 10x40. Đếm số lượng bào tử trong 5 ô lớn, mỗi ô lớn có 16 ô nhỏ. Chọn 4 ô, ở 4 góc và một ô chính giữa buồng đếm (phương pháp 5 điểm chéo góc). Đếm 3 lần lấy giá trị trung bình.
• Công thức tính bào tử
A: Tổng số bào tử đếm được trong 80 ô nhỏ (16 ô đếm). Thể tích của 1 ô vuông nhỏ là 1/4000 mm3,1 mm3 = 10-3 ml N: Số lượng bào tử trong 1ml dung dịch.
k: Hệ số pha loãng (đơn vị tính: lần).