* Nhân nuôi nấm Isaria javanica:
Thu thập mẫu nấm Isaria javanica về phân lập trên PDA trong phòng thí nghiệm theo phương pháp của Luangsa - ard J. J. và cs. (2007). Nhân nuôi nấm trên PDA trong đĩa petri tạo nguồn giống nấm.
Các mẫu vật thu thập được phân loại và đánh giá dưới kính hiển vi theo phương pháp Lacey and Brooks (1997) [57]. Phân lập các bào tử đơn dựa theo phương pháp của Choi Y.W. et al. (1997) [33], Janet Jennifer Luangsa-ard et al. (2006) [44]. Cấy chuyển sang môi trường Potato Dextrose Agar (PDA) theo phương pháp của Brown and Smith (1957) [25]. Sau khi bảo quản ở nhiệt độ 25 - 260C trong 14 ngày đặc điểm hình thái của bào tử, sợi nấm, cấu trúc quả thể và một số đặc điểm sinh học khác được phân tích, nhận dạng các loài nấm ký sinh côn trùng theo phương pháp của Janet Jennifer Luangsa-ard (2007) [45], Sung et al. (2007) [81].
Chuẩn bị môi trường PDA
- Môi trường PDA bao gồm các thành phần sau: Khoai tây (Potato), 200 gam; Đường Glucozơ 20 gam; Agar 20 gam; Nước cất 1000 ml.
- Tiến hành:
Bước 1. Khoai tây được rửa sạch và gọt vỏ, để ráo nước
Bước 2. Cân 200g khoai tây và cắt nhỏ theo kích thước 1,0x1,0 cm rồi cho vào nồi cùng 1000ml nước cất, nấu mềm khoảng 45 phút đến 1 giờ.
Bước 3. Dùng dụng cụ phân lập đã vô trùng để lấy bào tử rồi rải đều trên đĩa môi trường hoặc đặt nghiêng trên đĩa petri để cho phóng bào tử và đánh dấu vị trí đó.
Bước 4. Cho vào một cái chai loại 1000ml có nắp kín, đem hấp tiệt trùng ở 1210 C, 15psi, 20 phút. Lấy ra làm nguội và đổ vào đĩa petri ở điều kiện vô trùng trong buồng cấy.
Phân lập và nuôi cấy nấm trên môi trường PDA
Bước 1. Chuẩn bị môi trường (PDA có thêm chất kháng sinh), các dụng cụ để phân lập và nuôi cấy.
Bước 2. Mẫu đã hình thành bào tử phải phân lập ngay, mẫu non có thể để sau vài ngày và quan sát sự hình thành bào tử.
Bước 3. Dùng dụng cụ phân lập đã vô trùng để lấy bào tử rồi rải đều trên đĩa môi trường hoặc đặt nghiêng trên đĩa petri để cho phóng bào tử và đánh dấu vị trí đó.
hộp nhựa có giấy ẩm, quan sát sự nảy mầm bào tử dưới kính soi nổi Bước 5. Quan sát dưới kính hiển vi soi nổi để tìm ra bào tử nảy mầm. Dùng
dụng cụ nuôi cấy đã vô trùng cắt nhanh phần môi trường có chứa bào tử và chuyển sang đĩa PDA sạch khác
- Sau khi nhân nuôi sinh khối nấm trên môi trường PDA đạt nồng độ bào tử tối ưu thì pha chế phẩm thành dạng bột để phun.
Nhân nuôi vật chủ mọt ngô
- Dùng hộp nhựa có dung tích 5-10kg, thùng gỗ, hộp xốp…cho ngô hoặc lạc vào và thả mẫu mọt thu được vào thức ăn tương ứng. Lấy vải bịt kín miệng dụng cụ nuôi mọt. Thức ăn được cung cấp đều đặn từ 1-2 tuần/lần.
- Nuôi trong hộp nhựa, có thức ăn “sạch”, theo dõi và kiểm tra hàng ngày