- Dung dịch mẫu Placebo: cân khoảng 220 mg hỗn hợp Placebo trên Tiến hành xử lý như mẫu thử Lọc qua màng lọc 0,45μm.
3.3.1 So sánh phương pháp đã xây dựng với phương pháp đã đăng ký trong TCCS (phương pháp đo quang, kèm chất chuẩn)
trong TCCS (phương pháp đo quang, kèm chất chuẩn)
Để so sánh đánh giá phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng mới xây dựng với phương pháp định lượng đã đăng ký trong TCCS chúng tôi phân tích song song mẫu thử viên nang Sibethepharm 5,0mg (Flunarizne 5,0 mg) của Công ty CP Dược – VTYT Thanh Hóa sản xuất SKS: 001; HD 12/2015.
Mỗi phương pháp tiến hành độc lập 6 lần, so sánh kết quả giá trị trung bình của 2 dãy sử dụng hàm T-test.
+ Kết quả định lượng mẫu thử bằng phương pháp đã đăng ký (UV-VIS).
Dung dịch mẫu chuẩn: Cân 0,0246g chất chuẩn Flunarizin HCl cho vào bình định mức 200 ml, hòa tan và pha loãng vừa đủ thể tích bằng dung dịch HCl 0,1N. Hút chính xác 5 ml dung dịch trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm dung dịch HCl 0,1N vừa đủ tới vạch và lắc đều.
Dung dịch mẫu thử: khối lượng trung bình viên: 0,1135 g/viên. Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng khoảng 2 viên cho vào bình định mức 100 ml, thêm 50 ml HCL 0,1N, lắc siêu âm trong 5 phút, thêm dung dịch HCl 0,1N vừa đủ 100 ml. Lọc. Hút chính xác 5 ml dung dịch trên, cho vào bình định mức 50 ml, thêm dung dịch HCl 0,1N vừa đủ.
Đo mật độ quang ở bước sóng λ = 253 nm; cuvet 1 cm; mẫu trắng là dung dịch HCl 0,1N
38
Bảng 3.7 Kết quả định lượng mẫu thử bằng phương pháp UV-VIS
STT Khối lượng cân
mẫu (g) Mật độ quang Hàm lượng so với nhãn (%) 1 Mẫu chuẩn 0,421 2 0,2213 0,408 101,74 3 0,2301 0,431 103,37 4 0,2298 0,424 101,82 5 0,2235 0,408 100,74 6 0,2251 0,414 101,50 7 0,2199 0,407 102,14 Trung bình 101,88 SD 0,87 RSD (%): 0,85
+ Kết quả định lượng bằng phương pháp HPLC. Kết quả định lượng mẫu thử bằng phương pháp HPLC đã xây dựng được lấy từ mục 3.2.5; bảng 3.4
39
Bảng 3.8. Kết quả so sánh hai phương pháp thử
STT Phương pháp HPLC Phương pháp UV-VIS
1 101,80 101,74 2 102,08 103,37 3 103,36 101,82 4 102,82 100,74 5 104,02 101,50 6 103,77 102,14 Trung bình 102,98 101,88 SD. 0,90 0,87 T-test = 2,02 < 2,57 Tbảng (0,05; Df =5)
Kết quả thực nghiệm cho thấy:
+ Khi định lượng song song mẫu thử bằng phương pháp HPLC mới xây dựng và phương pháp UV-VIS đã được đăng ký trong TCCS của thuốc viên nang Sibethepharm 5,0 mg của Công ty CP. Dược – VTYT Thanh Hóa. Kết quả định lượng bằng 2 phương pháp khác nhau không có ý nghĩa thống kê với mức độ tin cậy 95%.