Có nhiều cách để chiết tách hợp chất hữu cơ ra khỏi cây cỏ. Các kỹ thuật đều xoay quanh hai phương pháp chính là chiết lỏng – lỏng và chiết rắn – lỏng. Trong thực nghiệm, việc chiết rắn – lỏng được áp dụng nhiều hơn gồm: sự ngấm kiệt (percolaion), sự ngâm dầm (maceration)… Ngoài ra, còn có thể chiết bằng phương pháp lôi cuốn hơi nước, phương pháp sử dụng chất lỏng siêu tới hạn (supercritical fluid method), chiết có sự hỗ trợ của vi sóng.
2.2.1.1 Kỹ thuật chiết ngâm dầm (Maceration)
Ngâm bột cây trong một bình chứa bằng thủy tinh hoặc bằng thép không gỉ, bình có nắp đậy. Tránh sử dụng bình nhựa vì chất hữu cơ có thể hòa tan một ít nhựa, gây nhầm lẫn là hợp chất đó có chứa trong cây. Rót dung môi tinh khiết vào bình cho đều xấp xấp bề mặt của lớp bột cây. Giữ yên ở nhiệt độ phòng trong một đêm hoặc một ngày, để cho dung môi xuyên thấm vào cấu trúc tế bào thực vật và hòa tan các hợp chất tự nhiên. Sau đó, dung dịch chiết được lọc ngang qua một tờ giấy lọc, thu hồi dung môi sẽ có được cao chiết. Tiếp theo, rót dung môi vào bình chứa bột cây và tiếp tục quá trình chiết thêm một số lần nữa cho đến khi chiết kiệt mẫu cây. Có thể gia tăng hiệu quả sự chiết bằng cách thỉnh thoảng đảo trộn, xóc đều lớp bột cây hoặc có thể gắn vào máy lắc để lắc nhẹ.
Mỗi lần ngâm dung môi, chỉ cần 24 giờ là đủ vì với một lượng dung môi cố định trong bình, mẫu chất chỉ hòa tan vào dung môi đến mức bão hòa, không thể hòa tan thêm được nhiều hơn. Vì vậy, có ngâm lâu hơn cũng chỉ mất thời gian. Dung môi sau khi thu hồi được làm khan nước bằng các chất làm khan và được tiếp tục sử dụng để chiết các lần sau.
14
Hình 2.7: Kỹ thuật chiết ngâm dầm
2.2.1.2 Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng (Liquid – liquid extraction)
Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng được áp dụng để phân chia cao alcohol thô ban đầu hoặc dung dịch ban đầu thành những phân đoạn có tính phân cực khác nhau. Nguyên tắc của sự chiết là dung môi có tính phân cực khác nhau (yếu, trung bình, mạnh) sẽ hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực tương ứng với nó. Đây là phương pháp dựa trên sự phân bố của chất tan vào hai pha lỏng và hai pha lỏng này không hòa tan vào nhau. Việc chiết lỏng – lỏng được thực hiện bằng bình lóng. Trong đó, cao alcohol thô ban đầu hòa tan vào nước.
Việc chiết được thực hiện lần lượt bằng các dung môi hữu cơ có độ phân cực tăng dần. Với mỗi loại dung môi việc chiết được thực hiện nhiều lần, mỗi lần một lượng nhỏ thể tích dung môi, đến khi chiết kiệt mới chuyển sang dung môi khác.