- Trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất của phòng thắ nghiệm thuộc Trung tâm Chẩn ựoán Thú y trung ương, Cơ quan Thú y vùng 4, Chi cục thú y Quảng nam. - Các nguyên vật liệu khác: chuồng trại, thức ăn, nước uống, chăm sóc và nuôi dưỡng theo ựiều kiện thực tế của trại lợn, hộ chăn nuôi.
2.5. Phương pháp nghiên cứu
2.5.1. Phương pháp ựiều tra tình hình chăn nuôi lợn và tình hình dịch PRRS tạitỉnh Quảng Nam: tỉnh Quảng Nam:
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
28 - Phương pháp ựiều tra dịch tễ học mô tả sử dụng phiếu ựiều tra.
- Phương pháp ựiều tra dịch tễ học hồi cứu. 2.5.2. Phương pháp ựánh giá tắnh an toàn của vacxin
Theo dõi các biểu hiện khác thường của lợn trong vòng 3 - 7 - 14 ngày sau khi tiêm vacxin, ựánh giá kết quả.
2.5.2.1. Các chỉ tiêu theo dõi.
- Biểu hiện triệu chứng, lâm sàng trên lợn ựược tiêm phòng. - Số lợn chết.
- Phản ứng cục bộ tại nơi tiêm. - Tăng trọng bình quân hàng ngày. 2.5.2.2. Cách ựánh giá kết quả:
Vacxin ựạt yêu cầu khi:
- Không có lợn chết trong thời gian theo dõi.
- Không có những biểu hiện lâm sàng bất thường nào xảy ra do vacxin trong thời gian khảo nghiệm.
- Không có phản ứng bất lợi nào xảy ra trong 2 giờ sau khi tiêm vacxin và trong suốt 14 ngày sau khi tiêm vacxin.
- Không có phản ứng cục bộ nào tại vị trắ tiêm trong thời gian theo dõi. - Tăng trọng của lợn không bị ảnh hưởng bởi vacxin trên những lợn ựã ựược tiêm vacxin.
2.5.3. Phương pháp quan sát triệu chứng lâm sàng, bệnh tắch ựại thể.
Triệu chứng lâm sàng ựược theo dõi bao gồm các chỉ số về thân nhiệt, tần số hô hấp, tần số tim mạch và các biểu hiện lâm sàng khác trên lợn. Bệnh tắch
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
29 ựại thể ựược quan sát thông qua mổ khám theo quy trình mổ khám của Cục Thú y.
2.5.4. Phương pháp ELISA gián tiếp
2.5.4.1. Nguyên liệu, dụng cụ và hoá chất cần dùng * Bộ kắt INDEXX Herd Check gồm:
- đĩa nhựa 96 giếng - đối chứng dương, âm
- Nước rửa (washing concentrate) 10X. Khi sử dụng, pha nước rửa thành nồng ựộ 1X (1/10 nước rửa 10X và 9/10 nước cất).
- Dung dịch pha loãng mẫu (Sample Diluent)..
- Anti-Porcine HRPO conjugate- kháng kháng thể có gắn enzyme.
- TMB (3, 3, 5, 5 tetra methyl benzidine) substrate - hỗn hợp chất phát màu và cơ chất của phản ứng ELISA.
- Dung dịch dừng phản ứng (Stop solution). * Mẫu huyết thanh cần chẩn ựoán.
* Dụng cụ phòng thắ nghiệm bao gồm: máng ựể ựổ nguyên liệu, pipet ựơn, ựa kênh, máy ựọc ELISA...
* Sơ ựồ ựĩa ELISA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 PRR S NH C PRR S NH C PRR S NH C PRR S NH C PRR S NH C PRR S NH C A đC + đC+ 7 7 B đC - đC - C 1 1 D 2 2 E 3 3 F 4 4 G 5 5 H 6 6 46 46
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
30
2.5.4.2. Chuẩn bị
+ Chuẩn bị mẫu huyết thanh bằng cách pha loãng huyết thanh cần kiểm tra ở nồng ựộ 1/40 (10 ộl huyết thanh + 390 ộl PBS).
+ Chuẩn bị nguyên liệu cho phản ứng: Trước khi làm phản ứng, lấy nguyên liệu ra ựể ở nhiệt ựộ phòng từ 5- 10 phút.
+ Chuẩn bị ựĩa phản ứng.
2.5.4.3. Các bước tiến hành
- Bước 1: Nhỏ ựối chứng dương và âm theo ựúng sơ ựồ ựĩa ELISA (trang 38), với lượng 100 ộl.
- Bước 2: Nhỏ mẫu huyết thanh ựã chuẩn bị vào vị trắ từ 1 ựến 46 theo theo ựúng sơ ựồ. Mỗi giếng nhỏ lượng 100 ộl.
- Bước 3: ủ 30 phút ở nhiệt ựộ phòng.
- Bước 4: Rửa ựĩa 3- 5 lần bằng nước rửa. Mỗi lần rửa cho vào mỗi giếng 300 ộl dung dịch rửa.
- Bước 5: Nhỏ 100 ộl conjugate vào tất cả các giếng - Bước 6: ủ ở nhiệt ựộ phòng trong 30 phút.
- Bước 7: Rửa ựĩa 3- 5 lần bằng nước rửa. Mỗi lần rửa cho vào mỗi giếng 300 ộl dung dịch rửa.
- Bước 8: Nhỏ 100 ộl TMB
- Bước 9: ủ ở nhiệt ựộ phòng 15 phút.
- Bước 10: Nhỏ 100 ộl dung dịch dừng phản ứng.
- Bước 11: đọc kết quả ở bước sóng 650 nm, nhờ máy ựọc ELISA Labsystems multiskan MS.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
31 (∑OD sample - ∑ODneg)
S/P =
Giá trị trung bình (∑OD pos - ∑ODneg)
Chú thắch:
OD sample: Giá trị mật ựộ quang của mẫu chẩn ựoán.
OD pos : Giá trị mật ựộ quang ựối chứng dương. ODneg: Giá trị mật ựộ quang ựối chứng âm.
2.5.4.4. Cách ựánh giá kết quả
- Khi giá trị S/P ≥ 0,4: dương tắnh; - Khi giá trị S/P < 0,4: âm tắnh
2.5.5. Phương pháp ựánh giá hiệu quả sử dụng vacxin trong chống dịch
Sử dụng các thông số về chỉ tiêu kinh tế kỹ thuật của ựàn lợn nuôi, ước tắnh hiệu quả kinh tế khi sử dụng vacxin nhược ựộc chủng JXA1- R trong phòng chống dịch PRRS. Ước tắnh thiệt hại kinh tế khi dịch xẩy ra không sử dụng vacxin phòng chống dịch. So sánh hai giá trị kinh tế ựể làm rõ hiệu quả sử dụng vacxin nhược ựộc chủng JXA1- R trong phòng chống dịch PRRS.
2.5.6. Phương pháp xử lý số liệu:
Số liệu thu thập ựược xử lý theo phương pháp thống kê sinh học, sử dụng phần mềm Excel 2007 và Minitab 16.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
32
Chương 3:
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Tình hình chăn nuôi lợn tại tỉnh Quảng Nam năm 2013
Quảng Nam là tỉnh nằm ở miền Trung của Việt Nam, cách thủ ựô Hà Nội 860 km. Phắa Bắc giáp tỉnh Thừa Thiên Huế và thành phố đà Nẵng, phắa Nam giáp tỉnh Quảng Ngãi và tỉnh Kon Tum và cách Thành phố Hồ Chắ Minh 865 km, phắa Tây giáp tỉnh Sekong (Cộng hòa Dân chủ Nhân dân Lào); phắa đông giáp biển đông. Tổng diện tắch ựất tự nhiên của tỉnh là 1.043.836,96 ha. địa hình của tỉnh ựa dạng, thấp dần từ Tây sang đông, chia làm 3 vùng rõ rệt: vùng núi - trung du, vùng ựồng bằng và ven biển. Quảng Nam nằm trong vùng khắ hậu nhiệt ựới gió mùa, nhiệt ựộ trung bình 25,40C, lượng mưa trung bình hàng năm ựạt 2.000-2.500 mm, tập trung vào các tháng 9-10-11. Hệ thống sông ngòi tự nhiên dài khoảng 900 km. Tắnh ựến hết năm 2010, dân số Quảng Nam là 1.435.629 người, với mật ựộ dân số trung bình là 139 người/km2. Quá trình ựô thị hóa và di ựộng dân số trong những năm tới ựặt ra những vấn ựề cho sự phát triển công nghiệp và nông nghiệp của tỉnh Quảng Nam.
Ngành chăn nuôi của tỉnh Quảng Nam trong những năm gần ựây ựang phát triển. Theo số liệu thống kê của tỉnh tổng ựàn lợn của tỉnh năm 2012 là 579.971 con. Năm 2013 là 519.726 con trong ựó có 436.548 lợn thịt và 83.178 lợn nái. Tuy nhiên mô hình chăn nuôi lợn của tỉnh chủ yếu là chăn nuôi nhỏ lẻ hộ gia ựình, trong ựó có khoảng 22.000 lợn của 40 cơ sở chăn nuôi tập trung có quy mô ựàn từ 50 con trở lên và tập trung nhiều ở các huyện vùng trung du.
Chúng tôi ựã thống kê số liệu về tình hình chăn nuôi lợn tại ựịa bàn tỉnh Quảng Nam. Kết quả thống kê ựược thể hiện trên bảng 3.1.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
33
Bảng 3.1.Tình hình chăn nuôi lợn tại tỉnh Quảng Nam năm 2013 STT Huyện Tổng ựàn lợn Lợn thịt Lợn nái 1 Tam Kỳ 14.315 13.719 596 2 Hội An 4.088 4.005 83 3 Tây Giang 4.970 4.498 472 4 đông Giang 8.766 8.028 738 5 đại Lộc 60.375 51.414 8.961 6 điện Bàn 76.234 64.967 11.267 7 Duy Xuyên 48.600 36.687 11.913 8 Quế Sơn 59.041 51.069 7.972 9 Nam Giang 7.342 6.628 714 10 Phước Sơn 10.000 9.774 226 11 Hiệp đức 13.282 10.718 2.574 12 Thăng Bình 105.520 76.981 28.529 13 Tiên Phước 17.466 15.644 2.422 14 Bắc Trà My 13.079 11.372 1.707 15 Nam Trà My 12.489 11.133 1.356 16 Núi Thành 27.174 25.325 1.849 17 Phú Ninh 30.917 29.572 1.345 18 Nông Sơn 6.068 5.614 454 Tổng 519.726 436.548 83.178
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
34 Kết quả bảng 3.1 cho thấy trong số 18 huyện, thành phố của tỉnh Quảng Nam, huyện Thăng Bình có quy mô ựàn lợn chăn nuôi với số lượng lớn nhất với tổng ựàn là 105.520 con lợn trong ựó có 76.981 lợn thịt và 28.529 lợn nái. Hội An là nơi có số ựầu lợn ựược chăn nuôi ắt nhất với tổng số ựầu lợn là 4.088 con, trong ựó có 4.055 lợn thịt và 83 lợn nái. So với các tỉnh, thành phố lân cận thì quy mô chăn nuôi lợn tại tỉnh Quảng Nam lớn hơn và khi dịch bệnh bùng phát tại tỉnh Quảng Nam sẽ ảnh hưởng trực tiếp ựến các tỉnh, thành phố xung quanh.
Hình 3.1. Bản ựồ phân bố ựàn lợn tại tỉnh Quảng Nam
3.2. Tình hình dịch PRRS tại tỉnh Quảng Nam
3.2.1. Tình hình dịch PRRS tại tỉnh Quảng Nam từ năm 2007 ựến năm 2012
Dịch PRRS thể ựộc lực cao bùng phát mạnh tại Việt Nam từ năm 2007 và Quảng Nam là ựịa phương bị dịch gây thiệt hại nặng nề từ ựợt dịch tháng 3 năm 2007. Từ ựó ựến nay, mầm bệnh luôn tồn tại trong ựàn lợn của tỉnh và gây nên dịch lúc mạnh, lúc yếu cho người chăn nuôi. Chúng tôi ựã thu thập số liệu về
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
35 tình hình dịch PRRS tại tỉnh Quảng Nam từ năm 2007 ựến 2012 (bảng 3.2) và một số tháng ựầu năm 2013 (bảng 3.3).
Bảng 3.2. Tình hình dịch PRRS xẩy ra tại tỉnh Quảng Nam từ năm 2007 ựến 2012 Năm Số huyện Số xã, phường có dịch Số bệnh (con) Số hủy (con) Trọng lượng hủy (kg) 2007 14 117 32.213 5.111 195.207 2008 4 24 1.445 1.111 45.683 2009 8 65 3.926 3.878 135.352 2010 9 78 39.974 25.525 1.023.281 2011 4 18 2.358 1.194 51.040 2012 3 6 1.246 454 26.556 Tổng 81.162 37.273 1.477.119
Quảng Nam có nhiều tuyến ựường bộ quan trọng nối liền với các ựịa phương ựi qua như Quốc lộ 1A, ựường Hồ Chắ Minh, Quốc lộ 14B, 14D và 14E cùng với 941 km sông ngòi tự nhiên, là những yếu tố góp phần làm cho dịch bệnh dễ lây lan trong toàn tỉnh hoặc từ tỉnh này sang tỉnh khác
Trong 6 năm, từ 2007 ựến 2012, dịch PRRS ựã xảy ra tại tỉnh Quảng Nam gây bệnh cho 81.162 con lợn, số lợn bị tiêu hủy là 37.273 con với tổng trọng lượng lên ựến 1.477.119 kg. Năm 2007, mặc dù số lợn bị bệnh không phải là cao nhất( 32.213 lợn) nhưng bệnh lan tràn rộng nhất tới 14 huyện và 117 xã, phường có dịch. Năm 2010, dịch PRRS bùng nổ với quy mô rộng lớn. Dịch ựã tràn lan khắp 9 huyện, 78 xã, phường của tỉnh Quảng Nam, PRRSV ựã gây bệnh cho
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
36 39.974 lợn, số lợn phải tiêu hủy là 25.525 con và trọng lượng tiêu hủy lên tới 1.023.281 kg. Năm 2010 cũng là năm dịch PRRS xảy ra mạnh trên cả nước với 289 huyện của 49 tỉnh thành , tổng số lợn mắc bệnh là 833.641 con và số lợn chết, tiêu hủy lên ựến 457.708 con.
đỗ Hữu Dũng và cộng sự năm 2013 ựã ựánh giá ựặc ựiểm dịch tễ không gian và thời gian của PRRS tại Việt Nam giai ựoạn 2007 - 2012 và cho biết nguy cơ có dịch PRRS (95% CI) ở tỉnh Quảng Nam là khá cao với tỷ lệ 42,5% (biến ựổi từ 36,2 ựến 49,2%). Những kết quả ựiều tra của chúng tôi cho thấy, dịch PRRS hoành hành tại tỉnh Quảng Nam liên tục từ năm 2007 ựến nay. Về mặt thời gian, hàng năm dịch ựều xảy ra nhưng với mức ựộ khác nhau. điều ựó có thể là do ựộc lực của virut ở mỗi thời ựiểm có thể ựã khác nhau. Về mặt không gian, dịch xảy ra và gây thiệt hại nặng ở các ựịa phương có số lợn lớn như Thăng Bình, đại Lộc, Duy Sơn, Quế Sơn (hình 3.1). điều ựó nói lên tầm quan trong của việc quy hoạch chăn nuôi, nhất là về mật ựộ ựàn lợn.
3.2.2. Tình hình dịch PRRS tại tỉnh Quảng Nam ựầu năm 2013
Năm 2013, dịch PRRS tiếp tục nổ ra tại tỉnh Quảng Nam. Mạng lưới thú y xã tại huyện Quế Sơn ựã xác nhận những ca nghi ngờ PRRS từ cuối tháng 1/2013. Chi cục Thú y ựã tiến hành mổ khám, lấy mẫu bệnh phẩm chuyển về Cơ quan Thú y vùng IV và tiến hành công tác ựiều tra ổ dịch. Kết quả ựiều tra ổ dịch ựã xác ựịnh ựược ngày bắt ựầu xuất hiện dịch từ ngày 25/ 1/ 2013. Nguồn gốc dịch có thể là từ những ổ dịch cũ và không loại trừ khả năng có sự lây lan từ những xe vận chuyển lợn từ ngoài tỉnh vào trạm trung chuyển ở chợ Bà Rén (Quế Sơn ).
Ngày 5/2/2013 xã Quế Lộc thuộc huyện Nông sơn báo có dịch. Ngày 14/2/2013 một số xã của huyện đại Lộc báo có dịch. Ngày 16/2/2013 xã Tiên Sơn huyện Tiên Phước báo có dịch.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
37 Ngày 18/2/2013 UBND tỉnh công bố dịch toàn tỉnh.
Ngày 21/2/2013 một số xã của 2 huyện Duy Xuyên, điện Bàn báo có dịch. Ngày 27/2/2013 là ngày con lợn mắc PRRS cuối cùng ựã ựược xử lý, tiêu hủy. Ngày 07/3/2013 Ủy ban nhân dân tỉnh có thông báo số 88/TB-UBND về việc giải tỏa từng phần các biện pháp chống dịch PRRS ở lợn tại 11 huyện, thành phố thuộc vùng ựệm: Tam Kỳ, Hội An, Núi Thành, Phú Ninh, Bắc Trà My, Nam Trà My, Nam Giang, đông Giang, Tây Giang, Hiệp đức và Phước Sơn.
Ngày 15/03/2013, UBND tỉnh tiếp tục có Thông báo số 98/TB-UBND về việc giải tỏa từng phần các biện pháp chống dịch PRRS ở lợn tại 06 huyện: Nông Sơn, Tiên Phước, điện Bàn, Quế Sơn, đại Lộc và Duy Xuyên.
Ngày 20/03/2013 UBND tỉnh ban hành Quyết ựịnh số 838/Qđ-UBND về việc công bố hết dịch PRRS ở lợn trên ựịa bàn tỉnh Quảng Nam.
Như vậy, chỉ trong vòng ba tháng ựầu năm 2013 ựã có 37/244 xã, phường với 4.416 con lợn mắc bệnh. đến ngày 27/02/2013, tổng số thôn có dịch là 169 thôn, với 1.276 hộ. Số lợn mắc bệnh lên ựến 4.416 con, số chết và phải tiêu hủy là 1.962 con. Trọng lượng tiêu hủy là 37.338 kg. Trong số 7 huyện công bố dịch, huyện đại Lộc có dịch PRRS xảy ra nặng nhất. Dịch ựã tràn qua 10 xã, 62 thôn và 426 hộ. Số lợn bị mắc bệnh ở đại Lộc là 1.803 con, số lợn chết là 474 con và tiêu hủy 307 con với trọng lượng tiêu hủy là 13.848,5 kg. Tại huyện Nông Sơn dịch PRRS mới xảy ra ở 1 thôn, 1 xã, số lợn mắc bệnh ở huyện Nông Sơn là 45 con trong ựó 16 con chết, 30 con tiêu hủy với trọng lượng tiêu hủy là 779,5 kg. Số lợn bị bệnh ở huyện Tiên Phước là 69 con, số lợn bị chết là 10 con và số lợn phải tiêu hủy là 22 con với trọng lượng tiêu hủy là 793 kg. Như vậy trong 7 huyện có dịch PRRS của tỉnh Quảng Nam, tắnh ựến thời ựiểm 1/3/2013, huyện Quế Sơn dịch bùng phát ra sớm nhất (ngày 25/ 01/ 2013) và huyện điện Bàn là huyện cuối cùng phát hiện lợn mắc PRRS (ngày 21/ 02 / 2013). Diễn biến tình
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ
38 hình dịch bệnh tại các xã có dịch PRRS tại tỉnh Quảng Nam (tắnh ựến ngày 26/02/2013) ựược thể hiện tại hình 3.2, hình 3.3 và hình 3.4.