2. Mục tiêu nghiên cứu
2.4.5. Nghiên cứu tổn thương bệnh lý ở phổi chó mắc bệnh viêm phổi
+ Tổn thương ựại thể: Tiến hành mổ khám, quan sát các tổn thương bệnh lý. + Tổn thương vi thể: Lấy miếng phổi ở vùng phổi viêm ngâm trong dung dịch focmon 10% ựể làm tiêu bản tổ chức học vi thể.
Cách làm tiêu bản: Phổi chó mắc bệnh ựược cố ựịnh bằng dung dịch Formol 10% (thể tắch Formol gấp 10 Ờ 20 lần thể tắch tổ chức phổi).
- Tẩy nước làm trong
+ Lấy bệnh phẩm ra khỏi dung dịch Formol 10% rồi ựem rửa nước từ 12 Ờ 24 giờ (rửa dưới vòi nước chảy nhẹ) ựể trôi hết Formol.
+ Khử nước: Mẫu bệnh phẩm rửa nước xong thấm nhẹ trên giấy lọc rồi cho vào hệ thống cồn Ethylic với thời gian như sau: cốc 1 là cồn 700 với thời gian 2 - 4 giờ, cốc 2, 3, 4 là cồn 1000 với thời gian 4 Ờ 6 giờ. Thời gian có thể thay ựổi tùy mẫu tổ chức to hay nhỏ.
+ Làm trong: Lấy miếng tổ chức ra khỏi cồn, thấm nhẹ trên giấy lọc rồi cho vào hệ thống 3 lọ Xylen mỗi lọ 2 giờ. Thời gian có thể thay ựổi tùy theo miếng tổ chức to hay nhỏ. Sau khi ựi qua lần lượt 3 lọ Xylen, miếng tổ chức trong như ựường phèn là ựược, nếu không phải khử lại từ cồn tuyệt ựối rồi lại ựưa vào dung dịch làm trong.
- Tẩm parafin gồm: Cốc 1: Parafin + Xylen theo tỷ lệ 1:1 từ 2 Ờ 12 giờ ở 370C, sau ựó lần lượt cho qua 3 cốc parafin ở nhiệt ựộ 560C mỗi cốc 4 Ờ 6 giờ. (Khi tẩm cần theo dõi nhiệt ựộ liên tục, nếu nhiệt ựộ quá cao hoặc quá thấp miếng tổ chức sẽ bị hỏng).
- đổ Block: Chuẩn bị ựầy ựủ dụng cụ, khuôn giấy, parafin phải nóng chảy hoàn toàn nhưng nhiệt ựộ không ựược quá cao sẽ ảnh hưởng ựến chất lượng tiêu bản sau nàỵ đợi cho parafin ựông ựặc hoàn toàn, bóc bỏ khuôn giấy và sửa lại Block cho vuông vắn.
- Cắt dán mảnh: cắt miếng tổ chức trên máy cắt Microtom với ựộ dày 3ỡm. Mảnh tổ chức khi ựược cắt ra sẽ ựược ựể tãi phẳng nhờ nước trứng trên ngọn lửa ựèn cồn. để miếng tổ chức khô nhờ không khắ sau một thời gian thì cho vào tủ ấm 370C.
- Nhuộm tiêu bản:
+ Tẩy parafin: cho tiêu bản lần lượt qua 3 lọ Xylen mỗi lọ 3 Ờ 5 phút. Khi cho tiêu bản qua Xylen phải thường xuyên nhấc lên nhấc xuống cho tan parafin, dùng khăn lau sạch parafin xung quanh miếng tổ chức.
+ Tẩy Xylen: dùng cồn Ethylic, cốc 1 dùng cồn 960 từ 3 Ờ 5 phút; cốc 2, 3 dùng cồn 1000 từ 3 Ờ 5 phút.
+ Nhuộm Hematoxylin: ngâm tiêu bản trong dung dịch Hematoxylin khoảng 5 Ờ 10 phút tùy theo chất lượng thuốc nhuộm và ựộ dày tiêu bản. Sau khi nhuộm Hematoxylin phải kiểm tra, nếu màu tiêu bản nhạt có thể nhúng nhanh tiêu bản qua NaHCO3 1% ựể tiêu bản ựậm hơn (Cách pha dung dịch NaHCO3 1%: NaHCO3 1 gam, nước cất 100ml), nếu tiêu bản ựậm quá có thể nhúng nhanh qua cồn Axit chlohydric. Sau khi ựiều chỉnh màu rửa sạch tiêu bản bằng nước cất.
+ Nhuộm Eosin: cho tiêu bản vào Eosin khoảng 30 giây Ờ 2 phút tùy theo thực tế, nếu màu Eosin nhạt có thể cho vào dung dịch Eosin 1 Ờ 2 giọt Axit axetic. Sau ựó rửa bằng nước cất 1 Ờ 2 phút.
+ Tẩy nước: dùng cồn Ethylic tẩy nước trong tiêu bản. Cốc 1 dùng cồn 900 trong 2 Ờ 3 phút; cốc 2, 3 dùng cồn 1000 trong 3 Ờ 5 phút.
+ Làm trong: cho tiêu bản qua 2 cốc Xylen mỗi cốc 3 Ờ 5 phút - Gắn lamen, dán nhãn và ựọc kết quả trên kắnh hiển vị
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN