a. Mục đích:
Mục đích là phân lập được các dòng nấm mốc thuần chủng trong các loại men cơm rượu trên thị trường.
Cấy trên bề mặt đĩa petri chứa môi trường PGA
Ủ 30oC, 24 - 48 giờ
Tách ròng và làm thuần từng khuẩn lạc
Kiểm tra độ ròng (quan sát bằng kính lúp)
Trữ giống trong ống thạch nghiêng (4oC) Dùng kim cấy lấy phần mốc
mọc trên bề mặt Nghiền mịn Lấy 1g mẫu
Tăng sinh trong 2 bình tam giác (250ml) chứa 100ml môi trường PG
Ủ 30oC (48 giờ) Viên men cơm rượu
b. Bố trí thí nghiệm Sơ đồ bố trí thí nghiệm:
c. Cách tiến hành:
Phân lập nấm mốc là quá trình tách riêng các chủng nấm mốc từ quần thể ban đầu và đưa về dạng thuần khiết. Nấm mốc ở dạng thuần khiết là giống nấm mốc được tạo ra từ một tế bào ban đầu.
Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng khoai tây - glucose (PG): khoai tây được gọt vỏ, cắt lát và đun sôi với thể tích nước cất đã được chuẩn bị, thời gian đun khoảng 15 - 20 phút tính từ thời điểm bắt đầu sôi. Sau khi đun tiến hành lọc qua vải the để loại bỏ phần bã khoai, chỉ lấy phần dịch trích khoai tây. Thành phần khoai tây, glucose và các chất đã được chuẩn bị như sau: khoai tây 20%, glucose 2%, (NH4)2SO4 0,2%, KH2PO4
0,1%, lượng nước dùng để nấu khoai tây vừa đủ 100%. Dịch trích khoai tây sau khi bổ sung glucose và các chất khoáng được khuấy đều và tiến hành khử trùng ở 121oC, 15 phút.
Lấy 1g men đã nghiền sẵn cho vào bình tam giác chứa 100ml môi trường PG. Ủ trên máy lắc với vận tốc 150 vòng/phút trong 48 giờ. Quan sát mỗi ngày đến khi trên bề mặt xuất hiện nhiều khuẩn ty trắng. Dùng que cấy lấy một ít sợi nấm mốc cấy vào đĩa môi trường PGA, ủ ở 30oC. Sau vài ngày từ các đĩa thạch có nấm mốc phát triển tốt, riêng rẻ. Chọn các khuẩn lạc có các đặc điểm khác nhau như: màu sắc, đường kính, độ dày của hệ khuẩn ty. Cấy chuyền nhiều lần và kiểm tra độ ròng bằng cách quan sát màu sắc, cách phát triển nhanh/chậm, kích thước của khuẩn lạc, độ dày/mỏng của hệ khuẩn ty. Quan sát dạng bào tử (trần hay kín), dạng tế bào (có vách ngăn hay không có vách ngăn), dạng cuốn bào tử (phân nhánh hay không phân nhánh) trên kính hiển vi quang học. Trữ các dòng thuần trên môi trường thạch nghiêng PGA có bổ sung khoáng và bảo quản ở 4oC.
d. Kết quả thu nhận:
- Các dòng nấm mốc phân lập được.
- Các đặc điểm hình thái, sinh lý của các dòng nấm mốc phân lập được.