2. 3.2 Các đặc tính của tinh dịch
2.10Các giống heo
23
Đặc điểm: màu lông da trắng đan xen từng đám đen - trắng loang không đều trên cơ thể, tai thẳng đứng, đầu to vừa phải, mõm thẳng, 4 chân thẳng, mông nở, đùi to, lưng rộng.
Hình 2.1: Heo Pietrain
Nguồn: http://ttgiongvatnuoipy.com
Chỉ tiêu năng suất: heo đực tuổi trưởng thành đạt 250 - 280 kg và heo cái đạt 180 - 200 kg. Khả năng tăng trọng từ 35 - 90 kg là 770 ngày. Tiêu tốn 2,58 kg thức ăn cho 1 kg tăng trọng.
Ưu điểm và nhược điểm: Thích nghi kém ở khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, khả năng chịu đựng kém, nhạy cảm với stress. Tỉ lệ nạc cao nhất trong các giống heo ngoại 60 - 62% nạc. Heo Pietrain thường sử dụng để lai với Duroc để tạo ra đực cuối cùng nhằm năng cao nâng suất thịt mông và tỉ lệ nạc.
2.10.2 Giống heo Duroc
Nguồn gốc: heo Duroc xuất xứ từ Bắc Mỹ.
Đặc điểm: heo Duroc có thân hình vững chắc, long có màu nâu vàng nhạt đến nâu sẩm, bốn chân to khỏe, vững chắc, ngực sâu, rộng, mông vai phát triển và cân đối, mõm thẳng, tai to ngắn, ở phần tai trước cụp, gập về phía trước, chất lượng thịt tốt. Khả năng tăng trọng nhanh, tiêu tốn thức ăn/1 kg tăng trọng thấp, đẻ con ít, tiết sữa kém.
24
Hình 2.2: Heo Duroc
Nguồn: http://ttgiongvatnuoipy.com
Chỉ tiêu năng suất: đực giống trưởng thành nặng 300 - 350 kg, nái nặng 200 - 250 kg. Mỗi lứa đẻ 7 - 8 con. Tăng khối lượng nhanh 0,7 kg/ngày. Tỉ lệ nạc 58 - 60,4%.
Ưu điểm và nhược điểm: thích ứng chịu đựng cao với điều kiện khí hậu, ít nhạy cảm với stress. Khả năng sinh trưởng tốt và phẩm chất thịt heo tốt và ngon. Sử dụng heo Duroc cho lai kinh tế tăng trọng nhanh, tỉ lệ nạc cao.
2.10.3 Giống heo Landrace
Nguồn gốc: Landrace là giống heo hướng nạc có nguồn gốc từ Đan Mạch. Đặc điểm: màu lông da trắng tuyền, mông nở, dài đòn, mình thon, mõm dài, tai rủ về phía trước che cả mắt, bốn chân hơi yếu.
Hình 2.3: Heo Landrace
Nguồn: http://ttgiongvatnuoipy.com
Chỉ tiêu năng suất: heo đực tuổi trưởng thành nặng 270 - 300 kg và heo nái nặng 200 - 230 kg. Tỉ lệ nạc 54 - 56%. Đẻ nhiều con 10 - 12 con/lứa.
25
Ưu điểm và nhược điểm: thích nghi kém trong điều kiện nhiệt đới nóng ẩm. Hướng nuôi là thuần, lai ngoại x ngoại, ngoại x nội để thực hiện chương trình nạc hóa đàn heo.
2.10.4 Giống heo lai Pi - Du
Nguồn gốc: đây là giống heo lai được tạo ra từ heo đực giống ngoại Pietrain và heo nái giống ngoại Duroc. Giống heo Pi - Du có tỷ lệ máu lai 50% giống Duroc, 50% Pietran được chọn lọc qua nhiều thế hệ thừa hưởng được các ưu điểm của hai giống heo trên về khả năng tăng trọng, chất lượng thịt và tỷ lệ nạc cao.
Đặc điểm: màu lông nâu nhạt, đỏ thẫm, tai cúp về phía trước, mõm thẳng, thân hình dài, mông vai phát triển, tăng trọng nhanh.
Hình 2.4: Heo lai Pi - Du
Nguồn: http://nnptntvinhphuc.gov.vn
Chỉ tiêu năng suất: trọng lượng trưởng thành con đực: 300 - 350 kg. Tỉ lệ nạc 60 - 62%. Đạt 100 kg khi được 150 - 160 ngày tuổi.
Ưu điểm và nhược điểm: tăng trọng nhanh, cho nạt nhiều trong thân thịt. Dùng làm con đực cuối cùng để lai với heo Yorkshire hay Landrace… tạo ra con thương phẩm có chất lượng rất cao.
2.11 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC
2.11.1 Tình hình nghiên cứu trong nước
Ở miền bắc Việt Nam, kỹ thuật thụ tinh nhân tạo heo được khởi đầu từ năm 1956, đến năm 1958 Kỹ thuật thụ tinh nhân tạo gia súc (chủ yếu là heo và bò). Từ năm 1960 trở lại đây, do yêu cầu giảng dạy, nghiên cứu khoa học và do sản xuất đòi hỏi, với sự giúp đỡ của chuyên gia Liên Xô cũ, kỹ thuật thụ tinh nhân tạo thực sự mới được phát triển mạnh mẽ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
26
Công tác nghiên cứu để hoàn thiện và nâng cao kỹ thuật thụ tinh nhân tạo heo được tiến hành thường xuyên ở một số viện nghiên cứu, trường Đại học và cả ở một số trạm trại. Tại đây đã tiến hành nghiên cứu về phẩm chất tinh dịch heo, một số đặc điểm lý hóa của tinh dịch heo, nghiên cứu về phương pháp lấy tinh bảo tồn tinh dịch heo, liều dẫn tinh…
2.11.2 Tình hình nghiên cứu ngoài nước
Hiện nay trên thế giới nhất là một số nước có nền chăn nuôi tiến tiến thì vấn đề nghiên cứu về môi trường và nhiệt độ bảo quản tinh dịch thích hợp, nồng độ tinh trùng trong một liều gieo tinh heo là (2x109 - 3x109) cũng được nhiều nhà nghiên cứu quan tâm đến, nhằm mục đích không ngừng nâng cao hơn nữa đối với hiệu quả đực giống.
Ở Liên Xô cũ từ năm 1930, Liên Xô cũ là quốc gia đầu tiên nghiên cứu kỹ thuật thụ tinh nhân tạo cho heo. Smidt (1965) đã nghiên cứu về tần số lấy tinh, bội số pha loãng, nhiệt độ bảo tồn.
Ở Nhật đã tiến hành các công trình nghiên cứu thụ tinh nhân tạo đầu tiên từ năm 1948. Từ đầu 1990 trở lại đây, một số nhà khoa học Nhật Bản đã có những công trình nghiên cứu sâu về kỹ thuật thụ tinh nhân tạo heo. Các công trình nghiên cứu bao gồm:
Nghiên cứu 6 công thức môi trường pha loãng và bảo quản là Polyzanon, BTS, Kieb, Zorlosco, Modela, Butschwiler. Với 3 mức nhiệt độ bảo quản là 150C, 100C, và 50C.
Phương pháp hạ nhiệt sau 15 ngày bảo quản ở 100C hoạt lực vẫn đạt 75%, tỉ lệ đẻ đạt 80%, với 10 - 12 con /ổ.
Ở Pháp kỹ thuật thụ tinh nhân tạo được nghiên cứu áp dụng từ năm 1958. Đầu tiên, thụ tinh nhân tạo heo được áp dụng trong phạm vi xung quanh 2 trạm Loudiac và Bretagne, đến năm 1975 được mở rộng và phát triển tương đối mạnh ra một số vùng khác. Steger (1971) nghiên cứu về ảnh hưởng của chiếu sáng, nhiệt độ đến chất lượng tinh dịch heo đực.
27
Chương 3
PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
3.1 PHƯƠNG TIỆN THÍ NGHIỆM
3.1.1 Thời gian và địa điểm
Thời gian: thí nghiệm được tiến hành từ ngày 24 tháng 07 năm 2013 đến ngày 20 tháng 12 năm 2013. Mẫu được thu thập tại cơ sở sản xuất tinh heo Năm Sang thuộc Cầu Kè - Trà Vinh và cơ sở sản xuất tinh heo Hai Chung thuộc Chợ Gạo - Tiền Giang.
Địa điểm: tại phòng thí nghiệm E202, bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ.
3.1.3 Đối tượng thí nghiệm
Thí nghiệm được tiến hành trên tinh dịch đã được pha loãng của giống heo Pi - Du và Pi - Lan.
3.1.4 Dụng cụ - hóa chất
Thùng trữ tinh, Waterbath.
Kính hiển vi, lame, lamelle, buồng đếm Neubauer. Nhiệt kế, cốc đông, ống đông có chia vạch.
Ống hút, ống pha loãng hồng cầu. Đèn cồn, cồn 960, Pipet 1 ml và 2 ml. Giấy đo pH, nước cất, nước đá khô.
Dung dịch Nacl 3%, Blue de Methylen 1%, Rough de Eosin 3%.
3.2 PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM
Chúng tôi tiến hành kiểm tra các chỉ tiêu sau để đánh giá phẩm chất tinh dịch heo đã được pha loãng pH, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng, tinh trùng sống/chết, tinh trùng kỳ hình.
3.2.1 pH
Trong điều kiện sản xuất, dùng giấy đo pH (1 - 14) là nhanh và tiện lợi, nhưng cần bảo quản giấy đo pH ở nơi khô ráo.
28
Giữ tinh dịch ở nhiệt độ cần kiểm tra khoảng 3 phút. Sau đó, nhỏ 1 - 2 giọt tinh lên giấy chỉ thị màu và đọc kết quả theo bảng so màu trong vòng 4 - 5giây.
3.2.2 Hoạt lực tinh trùng (A) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Phương pháp tiến hành như sau:
Giữ tinh dịch ở nhiệt độ cần kiểm tra khoảng 3 phút. Sau đó, dùng ống hút hút một giọt tinh để lên lame, dùng lamelle đậy lên giọt tinh sao cho giọt tinh được dàn mỏng, đều. Đặt tiêu bản lên kính hiển vi và quan sát ở vật kính X - 10 và X – 40, sau đó ước lượng tỉ lệ tinh trùng tiến thẳng trong vi trường kính hiển vi, và đánh giá theo thang điểm.
Bảng 2.2: Thang điểm đánh giá hoạt lực tinh trùng (Nguyễn Thiện và ctv, 2006) Điểm 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 Tỉ lệ TT tiến thẳng 95- 100 85- 95 75- 85 65- 75 55- 65 45- 55 35- 45 25- 35 15- 25 05- 15 Chú thích: TT: tinh trùng 3.2.3 Nồng độ tinh trùng (C)
Ðể xác định nồng độ tinh trùng trong một liều gieo, ta sử dụng phương pháp đếm trực tiếp bằng buồng đếm Neubauer.
Phương pháp tiến hành như sau:
Giữ tinh dịch ở nhiệt độ cần kiểm tra khoảng 3 phút. Sau đó, pha loãng 200 lần tinh dịch bằng dung dịch NaCl 3%, bằng cách dùng ống hút hồng cầu.
Hút tinh đến vạch 0,5, hút tiếp dung dịch NaCl 3% đến vạch 101. Lúc này tinh dịch đã được pha loãng 200 lần. Sau đó dùng bông hoặc giấy thấm lau khô đầu của ống hút. Lắc nhẹ rồi để yên 3 - 5 phút. Bỏ vài giọt đầu tiên trong ống rồi nhỏ tinh dịch lên mép của buồng đếm, hiện tượng mao dẫn sẽ kéo tinh dịch vào trong buồng đếm, để yên cho tinh trùng lắng xuống trong vài phút. Đặt buồng đếm lên khay kính hiển vi, quan sát với vật kính X - 10, khi thấy rõ chuyển sang vật kính X - 40 và tiến hành đếm.
29
Buồng đếm, dụng cụ pha loãng phải khô sạch, khi nạp tinh vào buồng đếm không có bọt khí lọt vào.
Cách đếm trong buồng đếm Neubauer:
Ở vật kính X - 10, quan sát toàn thể buồng đếm gồm có 9 ô vuông lớn, trong đó ô vuông lớn ở trung tâm được chia ra 25 ô vuông trung bình. Mỗi ô vuông trung bình được chia ra 16 ô vuông nhỏ. Tinh trùng được đếm ở 5 ô vuông trung bình (4 ô vuông ở 4 gốc và 1 ô vuông trung bình ở chính giữa). Khi đếm ta đếm tinh trùng từng ô ở 16 ô vuông nhỏ, mỗi ô vuông nhỏ có 4 cạnh thì chỉ đếm những tinh trùng có ở trong ô đếm và những tinh trùng có ở cạnh trên và cạnh trái của ô. Đối với ô trung bình có 3 đường gạch ngang, đầu tinh trùng vào hơn ½ thì tính tinh trùng vào ô đó.
Đếm cả hai buồng đếm rồi lấy số trung bình, nếu kết quả ở hai bên chênh lệch nhau đến 30% thì phải làm lại. Nếu tinh trùng tụ thành từng đám, không đếm được ở trong buồng đếm thì cũng phải làm lại.
(a) (b)
Hình 3.1: Vi trường buồng đếm Neubauer
Chú thích:
(a) 9 ô vuông lớn.
(b) 25 ô vuông trung bình chứa 16 ô vuông nhỏ/1 ô vuông trung bình. 1, 2, 3, 4, 5: các ô vuông cần đếm.
Công thức tính:
Nồng độ tinh trùng trong 1mm3:
C/mm3 = số TT 5 ô TB x 5 x 10 x 200 = số TT 5 ô TB x 104 Nồng độ tinh trùng trong 1ml:
30
C/ml = số TT 5 ô TB x 104 x103 = số TT 5 ô TB x 107 Nồng độ tinh trùng trong một liều gieo 80 ml:
C/80 ml = số TT 5 ô TB x 107 x 80 Trong đó: C: nồng độ tinh trùng TT: tinh trùng TB: trung bình 3.2.4 Tinh trùng sống/chết
Để xác định tỉ lệ tinh trùng sống, ta dùng phương pháp nhuộm Eosin 3%, trên cơ sở những tinh trùng chết sẽ bắt màu thuốc nhuộm còn những tinh trùng sống không bắt màu.
Cách tiến hành như sau: giữ tinh dịch ở nhiệt độ cần kiểm tra khoảng 3 phút. Lấy một lame khô sạch và ấm, sau đó nhỏ 1 giọt tinh lên lame kính, tiếp tục nhỏ 1 - 2 giọt dung dịch Eosin 3% lên giọt tinh. Dùng cạnh của một lame khác phết tiêu bản, sao cho giọt tinh được dàn đều lên mặt lame. Sau đó đưa lame lên kính hiển vi kiểm tra ở vật kính X - 40.
Những tinh trùng bắt màu đỏ hoặc hồng của Eosin là tinh trùng đã chết, còn những tinh trùng màu trắng (không bị nhuộm màu) là tinh trùng sống. Đếm và ghi lại có bao nhiêu tinh trùng sống trong tổng số 300 - 500 tinh trùng đếm được một cách ngẩu nhiên và tính tỉ lệ tinh trùng sống theo công thức:
Tinh trùng sống (%) = n x100/N
Trong đó:
n: số tinh trùng sống đếm được
N: tổng số tinh trùng đếm được (300- 500). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.2.5 Tinh trùng kỳ hình (K)
Để xác định tinh trùng kỳ hình dùng phương pháp nhuộm bằng xanh methylene 1%. Qua đó đánh giá tỉ lệ tinh trùng kỳ hình.
Cách tiến hành như sau: nhỏ 1 giọt tinh lên một đầu của lame khô, sạch, ấm, không bị trầy xước. Dùng cạnh của một lame khác dàn đều giọt tinh lên mặt lame. Sau đó, làm khô tiêu bản bằng đèn cồn. Sau khi tiêu bản đã khô, nhỏ vài giọt
31
thuốc nhuộm xanh methylene và nghiên tiêu bản cho thuốc nhuộm được dàn đều. Để yên tiêu bản trong vòng 30 phút, rồi rửa tiêu bản.
Cách rửa tiêu bản: dùng ống hút nhỏ giọt, nhỏ nhẹ nước cất xuống một đầu tiêu bản để cho nước loang nhẹ, làm trôi thuốc nhuộm. Làm khô tiêu bản dưới ngọn lửa đèn cồn rồi đưa lên kính hiển vi quan sát hình thái của tinh trùng ở vật kính X - 10 và X - 40. Đếm tổng số 300 - 500 tinh trùng xem trong đó có bao nhiêu tinh trùng kỳ hình và tính tỉ lệ tinh trùng kỳ hình theo công thức sau:
K (%) = n.100/N Trong đó: K: tỉ lệ phần trăm tinh trùng kỳ hình. n: tổng số tinh trùng kỳ hình đếm được. N: tổng số tinh trùng đếm được (300 - 500). Chú ý:
Đếm hết tinh trùng trong vi trường này, rồi mới chuyển sang vi trường khác.
Những vi trường quá dày khó đếm thì bỏ, chọn vi trường khác.
Chỉ dàn mỏng một lần, không chà đi xát lại gây ra kỳ hình nhân tạo dẫn đến không chính xác.
3.3 PHƯƠNG PHÁP THU THẬP VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU
Số liệu được thu thập từ quá trình khảo sát thực tế.
Dữ liệu được thu thập và xử lý dựa trên phép phân tích Anova one way sử dụng phần mềm thống kê Minitab 16.0
32
Chương 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 KẾT QUẢ KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG TINH DỊCH ĐÃ ĐƯỢC
PHA LOÃNG CỦA HEO ĐỰC PI – DU Ở NHIỆT ĐỘ 36,50C, 370C VÀ 37,50C
Để đánh giá chất lượng tinh trùng một cách chính xác, không ảnh hưởng đến kết quả thực thì tốt nhất nên kiểm tra tinh dịch trong điều kiện nhiệt độ là 370C (lame, lamelle, kính hiển vi phải giữ ấm). Tuy nhiên, câu hỏi đặt ra ở đây là nếu nhiệt độ kiểm tra biến động lên hoặc xuống do điều kiện thời tiết, nhiệt độ môi trường có ảnh hưởng đến kết quả kiểm tra hay không. Chính vì vậy, thí nghiệm được bố trí kiểm tra chất lượng tinh dịch ở 3 nhiệt độ 36,50C, 370C và 37,50C nhằm đánh giá ảnh hưởng của yếu tố nhiệt độ trong quá trình kiểm tra đến chất lượng tinh dịch. Chất lượng tinh dịch heo khi kiểm tra ở 3 nhiệt độ khác nhau được trình bày trong bảng kết quả sau:
Bảng 4.1: Chất lượng tinh dịch heo khi kiểm tra ở nhiệt độ 36,50C, 370C và 37,50C
Chú thích:
n: số mẫu kiểm tra
Kết quả từ Bảng 4.1 cho thấy không có sự khác biệt về hoạt lực tinh trùng khi kiểm tra ở 3 nhiệt độ 36,50C, 370C và 37,50C, hoạt lực tinh trùng lần lượt là (69,503,99), (75,703,18) và (75,902,75) với (P=0,322). Theo TCVN 1859/76 yêu cầu về hoạt lực tinh trùng heo trước khi phối giống tối thiểu là 70%. Kết quả thí nghiệm cho thấy, hoạt lực tinh trùng khi kiểm tra ở 3 nhiệt độ 36,50C, 370C và 37,50C của thí nghiệm đều đạt yêu cầu theo TCVN 1859/76. Như vậy, nếu nhiệt
Chỉ tiêu Đơn vị tính
Nhiệt độ kiểm tra
36,50C 370C 37,50C (n=10) pH - 6,900,03 7,100,03 7,100,03 Hoạt lực (A) % 69,503,99 75,703,18 75,902,75 Nồng độ (C) 109/80ml 4,080,19 4,000,21 4,080,14 Tỉ lệ sống % 77,202,43 86,101,03 80,202,24
33
độ kiểm tra chất lượng tinh dịch dao động trong khoảng 0,5% không ảnh hưởng đến kết quả kiểm tra. Ngoài ra, những mẫu tinh đã kiểm tra có hoạt lực tinh trùng cao hơn tiêu chuẩn, nên có thể kết luận rằng bước đầu những lọ tinh này đủ điều kiện để tiến hành gieo cho gia súc cái. Theo Nguyễn Thiện và ctv (2006), nhiệt độ