2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
3.2.5.Thử kháng sinh ựồ
+ Xác ựịnh số lượng tế bào vi khuẩn ựể tiến hành thử kháng sinh ựồ Ở mỗi mật ựộ vi khuẩn xác ựịnh bằng phương pháp so màu, dùng bộ ống chuẩn Mc-Falands ựều ựược tiến hành trang trên ựĩa MHA (theo Kock, 1987) nhằm xác ựịnh chắnh xác số vi khuẩn sống ựể tiến hành thử kháng sinh ựồ.
Bể 1 Bể 2 Bể 3 Bể 4
Bể 5
Bể 6 Bể 7 Bể 8 Bể 9
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ... 25
định lượng vi khuẩn trên cơ sở sử dụng nồng ựộ vi khuẩn gốc theo ống chuẩn của Mc-Falands số 3 ứng với 9ừ108 , sau ựó pha loãng nồng ựộ xuống 9ừ107, 9ừ106 .
Với từng nồng ựộ gốc sẽ pha loãng các nồng ựộ ựến hệ số pha loãng 10 -6 , 10 -7 , 10 -8 , từ mỗi nồng ựộ pha loãng sẽ lấy 0,1 ml dung dịch trang ựều trên ựĩa NA, mỗi nồng ựộ tiến hành trên 3 ựĩa. Sau 24 giờ nuôi cấy trong tủ ấm nhiệt ựộ 280 C tắnh ựược số lượng vi khuẩn có trong 0,1 ml hỗn dịch vi khuẩn ựể tiến hành thử kháng sinh ựồ là: 106 tb/ml; 107 tb/ml; 108 tb/ml.
- Tiến hành thử kháng sinh ựồ với mật ựộ vi khuẩn là 106 tb/ml; 107 tb/ml; 108 tb/ml.
- Chuẩn bị ựĩa giấy kháng sinh cho các loại kháng sinh cần thử nghiệm (Hàm lượng kháng sinh trên mỗi ựĩa giấy kháng sinh ựược chuẩn bị theo ựĩa giấy kháng sinh ựã thương mại hóa)
- Thắ nghiệm sẽ ựược lặp lại 3 lần trên các ựĩa petri khác nhau với cùng một loại kháng sinh ựối với mỗi mật ựộ của loài vi khuẩn cần thử nghiệm
Ớ Tiến hành thử riêng kháng sinh ựồ ựối với vi khuẩn thu ựược trên cá bệnh
Ớ Môi trường NA 1,5% NaCl ựược ựổ trên ựĩa petri, trang vi khuẩn lên các ựĩa petri ựã chuẩn bị.
Ớ đặt các khoanh giấy kháng sinh lên, ựưa vào tủ ấm 27- 290 C
Ớ đọc kết quả ựo ựường kắnh vô khuẩn sau 24h.
+ Xác ựịnh tắnh mẫn cảm của vi khuẩn với các chất kháng sinh
- Sử dụng phương pháp khuyếch tán trong thạch thịt của vi khuẩn với các ựĩa giấy kháng sinh tiêu chuẩn (CODE 1334E-OXOID)
- Dựa vào ựường kắnh vòng vô khuẩn, xác ựịnh tắnh mẫn cảm của vi khuẩn với chất kháng sinh
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ... 26 Ớ đường kắnh vòng vô khuẩn > 20mm: Vi khuẩn có tắnh mẫn cảm cao
Ớ đường kắnh vòng vô khuẩn 11- 20mm: Vi khuẩn có tắnh mẫn cảm
trung bình
Ớ đường kắnh vòng vô khuẩn <11mm: Vi khuẩn có tắnh mẫn cảm kém
Ớ đường kắnh vòng vô khuẩn 6mm: Vi khuẩn không có tắnh mẫn cảm