trong dung môi acid acetic 5% trên môi trƣờng đặc
Số thứ tự Nghiệm thức Lặp lại
1 Đối chứng nƣớc cất 1 x 2 dĩa
2 Đối chứng acid acetic 5% 1 x 2 dĩa
3 Đối chứng chitosan công nghiệp 1 x 2 dĩa
4 Dung dịch chitosan trích từ dòng nấm 1 3 x 2 dĩa
5 Dung dịch chitosan trích từ dòng nấm 2 3 x 2 dĩa
6 Dung dịch chitosan trích từ dòng nấm 3 3 x 2 dĩa
3.4.3.2. Khảo sát nồng độ tối thiểu có khả năng kháng khuẩn của chitosan *Bố trí thí nghiệm *Bố trí thí nghiệm
Trong thí nghiệm này chỉ sử dụng một loại chitosan đƣợc trích từ dòng nấm nào có tiềm năng để sản xuất chitosan với năng suất cao nhất. Tiến hành nuôi tăng sinh khối dòng nấm này trong 2L môi trƣờng nhằm thu đƣợc hàm lƣợng cao chitosan đủ phục vụ cho nghiên cứu này và các nghiên cứu tiếp theo. Chitosan sau khi đƣợc ly trích xong đƣợc pha loãng vào dung dich acid acetic 1% với nồng độ chitosan 1% (w/v). Từ dung dịch này, chuyển chitosan với các nồng độ 300mg/L, 500mg/L và 700mg/L vào môi trƣờng nuôi cấy để đánh giá nồng độ tối thiểu có khả năng kháng khuẩn của chitosan.
Chuyên ngành Công nghệ sinh học 24 Viện NC&PT Công nghệ sinh học
Bảng 5. Bố trí thí nghiệm khảo sát khả năng kháng khuẩn của chitosan trên môi trƣờng lỏng
Số thứ tự Nghiệm thức Chỉ tiêu đánh giá OD610nm
1 5mL LB Mẫu blank để đo OD cho nghiệm
thức 2
2 5mL LB + 30µL dịch vi khuẩn Đo OD ở bƣớc sóng 610nm
3 5mL LB + 350µL acid acetic 1% Mẫu blank để đo OD cho nghiệm
thức 4
4 5mL LB + 350µL acid acetic 1%
+ 30µL dịch vi khuẩn Đo OD ở bƣớc sóng 610nm
5 5mL LB + 150µL chitosan (tƣơng
đƣơng 300mg/L)
Mẫu blank để đo OD cho nghiệm thức 6
6 5mL LB + 150µL chitosan + 30µL
dịch vi khuẩn Đo OD ở bƣớc sóng 610nm
7 5mL LB + 250µL chitosan
(tƣơng đƣơng 500mg/L)
Mẫu blank để đo OD cho nghiệm thức 8
8 5mL LB + 250µL chitosan + 30µL
dịch vi khuẩn Đo OD ở bƣớc sóng 610nm
9 5mL LB + 350µL chitosan (tƣơng
đƣơng 700mg/L)
Mẫu blank để đo OD cho nghiệm thức 10
10 5mL LB + 350µL chitosan + 30µL
dịch vi khuẩn Đo OD ở bƣớc sóng 610nm