- Phương pháp HPLC. Các điều kiện:
. Pha tĩnh: silicagel có gắn thêm chuỗi Polypeptid 18 c
. Pha động: nước cất: methanol: acid acetic: acetonitril(60:30:6:4) Lọc qua màng có đường kính lỗ lọc 0,45|im
. Tốc độ bơm: 1,5 ml/phút.
. Detector: u v tại bước sóng Ằ=283nm.
Chuẩn bị mẫu thử: Cân chính xác khoảng 2,5gam bột Cốt toái bổ, cho vào bình nón có nút mài và thêm 100,0 ml DMSO và đậy nút lạị Đun nóng ở nhiệt độ 85°C-95°C với máy khuấy từ trong vòng ít nhất 45 phút. Để nguội và đem ly tâm. Pha loãng 20 lần bằng DMSỌ Lọc qua màng có đường kính lỗ lọc 0,45ịim.
Chuẩn bị mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 25mg chất chuẩn(đã làm khô đến khối lượng không đổi ở nhiệt độ 110°C), cho vào bình định mức 100ml, thêm DMSO đến vạch và lắc cho tan hoàn toàn. Lấy chính xác 5ml dung dịch trên vào bình định mức 25ml và thêm DMSO vào đến vạch, lắc đều(lml dung dịch chứa 0,05 mg chất chuẩn)
Kết quả : hàm lượng hesperidin và naringin trong Cốt toái bổ được tính theo công thức:
x { mg/ ) - s ' - m' xM x Cg x^
V ' v J S c X mt X nc
Trong đó :
+ St,Se: Là diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn. + Cc: Hàm lượng chất chuẩn (mg/ml).
+ mt,mc: Khối lượng mẫu thử và mẫu chuẩn (mg). + nt,nc: hệ số pha loãng của mẫu thử và mẫu chuẩn.
+ M: Khối lượng của Cốt toái bổ đem định lượng(mg).
* Định tính:
Theo các tài liệu của Trung Quốc thì trong thành phần ílavonoid của Cốt toái bổ có chứa: Naringin và hesperidin.
Do điều kiện không có naringin chuẩn mà chỉ có hesperidin chuẩn nên chúng tôi tiến hành định tính hesperidin trong hai mẵu nghiên cứụ
Tiến hành chạy HPLC theo phương pháp đã xây dựng , chúng tôi thu được kết quả như sau:
- Trong cả hai mẫu Cốt toái bổ đều không có hesperidin do không thấy xuất hiện chất nào có thời gian lưu trùng với thời gian lưu của hesperidin chuẩn (Xem sắc ký đồ ở phụ lục 2)