phản ứng hoá học
3.2.1.1 .Định tính flavonoid:
Lấy khoảng 10 g bột dược liệu cho vào bình cầu dung tích 250 ml, thêm ỈOOml cồn 90°. Đun sôi hồi lưu cách thuỷ trong vòng 2 giờ, lọc nóng, dịch lọc đem cô lấy cắn. Hoà tan cắn trong 50ml nước, lọc qua giấy lọc. Dịch lọc cho vào bình gạn và lắc với ethyl acetat 3 lần mỗi lần 20ml. Gạn lớp ethyl acetat làm các phản ứng sau:
- Phản ứng Cyanidin:
Cho vào Ống nghiệm nhỏ lml ethyl acetat ở trên, thêm vào một ít bột Mg kim loạị Nhỏ từng giọt acid HC1 đậm đặc (3-5 giọt).Đun cách thuỷ một vài phút.
Nhận xét: thấy lớp ethyl acetat chuyển từ màu vàng sang màu đỏ (phản ứng dương tính với cả hai loài cốt toái bổ).
- Phản ứng kiềm:
Nhỏ một giọt ethyl acetat ở trên lên giấy lọc. Hơ khô rồi để lên miệng lọ amoniac đậm đặc đã mở nắp, thấy màu vàng của dịch chiết tăng lên {phản ứng dương tính với cả hai loài cốt toái bổ).
- Phản ứng với H2S04 đặc:
- Phản ứng sắt (III) clorid trong cồn (1:1)
Cho vào Ống nghiêm 5ml ethyl acetat ở trên. Theo 3-5 giọt sắt (III) Clorid trong cồn (11) thấy xuất hiện tủa màu xanh đen. ( Phản ứng dương tính với cả hai loài cốt toái bổ)
Nhận x é t: Trong thân rễ của hai loài cốt toái bổ đều có Flavonoid.
3.2.1.2.Định tính acid hữu cơ:
Lấy 5g bột dược liệu, thêm 20ml nước đun sôi vài phút, lọc nóng lấy 3ml dịch lọc cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm vào tinh thể Na2C 03 thấy có bọt khí nổi lên (Phản ứng dương tính với cả hai loài).
Nhận xét: Thân rễ của cả hai loài đều chứa acid hữu cơ.
3.2.1.3.Định tính Alcaloid:
Trong bình nón có nút mài dung tích 100ml, cho khoảng 5g bột dược liệu, thấm ẩm bằng dung dịch NH4OH 6N, sau 10 phút cho 40 ml Clorofomn, đậy kín, ngâm 24 giờ. Cho dịch chiết Cloroform vào bình gạn chiết bằng dung dịch H2S04 i m. Chia dịch chiết acid vào 3 ống nghiệm nhổ (mỗi ống khoảng lml) làm các phản ứng:
- Ống 1: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff. Không thấy xuất hiện tủa da cam ở cả dịch chiết của 2 loài (Phản ứng âm tính).
- Ống 2: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer. Không thấy xuất hiện tủa màu trắng ở các dịch chiết của hai loài (Phản ứng âm tính).
- Ống 3: Thêm 2-3 giọt thuốc thử Boucherdat. Không thấy xuất hiện tủa màu nâu ở cả dịch chiết của hai loài (Phản ứng âm tính).
2>.2.\ẠĐịnh tinh anthranoid:
- Phản ứng Bomtraeger: Lấy lOg bột dược liệu, cho vào bình nón 250ml thêm 100ml acid sulfuric 10%. Đun sôi cách thuỷ trong 15 phút, lọc, chuyển dịch lọc sang bình gạn, lắc với 10ml ether ethylic để phân thành 2 lớp. Gạn lấy dịch chiết ether ethylic, cho vào dịch chiết ether ethylic 2ml NaOH
10%, lắc đềụ
Quan sát thấy lớp nước không xuất hiện màu đỏ. (Phản ứng âm tính với cả hai loài).
- Vi thăng hoa: Đặt một ít bột dược liệu trong một nắp nhôm. Hơ nhẹ trên đèn cồn cho đến khi bay hơi hết nước trong dược liệụ Đặt lên miệng nắp nhôm một tấm kính, trên tấm kính có để một miếng bông tẩm nước lạnh. Để nắp nhôm trực tiếp trên nguồn nhiệt. Sau 5-10 phút lấy tấm kính, để nguộị Quan sát trên kính hiển vi không thấy có tinh thể. (Phản ứng âm tính với cả hai loài)
Nhận xét: thân rễ của hai loài cốt toái bổ không có anthranoid.
3.2.1.5.Định tinh chất béo:
Nhỏ dịch chiết Cloroform của bột thân rễ cốt toái bổ lên tờ giấy lọc, hơ khô. Không để lại vết mờ trên giấy lọc (Phản ứng âm tính với cả hai loài cốt toái bổ).
Nhận x é t : Thân rễ của cả hai loài cốt toái bổ đều không chứa chất béo
3.2.1.6.Định tính Coumarin:
Lấy khoảng 5g bột dược liệu cho cốc có mỏ dung tích 100ml, thêm 50ml ethanol 90°, đun sôi cách thuỷ trong 2 phút, lọc qua giấy lọc, lấy dịch chiết cồn để thử các phản ứng định tính sau:
- Phản ứng diazo hoá: Trong ống nghiêm nhỏ cho lm l dịch chiết cồn, thêm 2ml Na2C03 2%. Đun sôi cách thuỷ đến sôị Để nguội thêm 2 giọt thuốc thử diazọ Quan sát thấy xuất hiện màu hồng nhạt ở dịch chiết của cả hai loàị
- Phản ứng mở đóng vòng lacton: Cho dịch chiết cồn vào hai ống nghiệm nhỏ, mỗi ống lml.
Ống 1: Thêm 0,5ml NaOH 10%. Ống 2: Để nguyên.
Đun cả hai ống nghiệm đến sôi, để nguộị Quan sát thấy:
A/ / ^
Ong 1: Màu vàng tăng thêm và vân trong suốt, không có tủạ Ống 2: Trong suốt.
Thêm vào cả 2 ống nghiệm, mỗi ống 2ml nước cất. Lắc đều quan sát thấy không có sự thay đổi của dịch trong 2 ống. (Phản ứng âm tính với cả hai loài cốt toái bổ).
- Vi thăng hoa:
Cho một ít dược liệu vào nắp nhôm, đặt lên bếp điện có lưới amiang cho đến khi bay hết hơi nước. Đặt phiến kính lên nắp nhôm.Trên phiến kính để sẵn một miếng bông tẩm nước lạnh. Sau 10 phút, lấy phiến kính ra để nguộị Nhỏ một giọt dung dịch KI 10% lên phiến kính. Soi dưới kính hiển vi không phát hiên có tinh thể. (Thí nghiệm âm tính với cả hai loài).
Nhận x é t : c ả hai loài cốt toái bổ đều không có Coumarin.
3.2.Ị7. Định tính đường khử tự do:
Cho vào ống nghiệm khoảng 2ml dịch chiết nước dược liệu, thêm 0,5ml thuốc thử Fehling A và 0,5ml thuốc thử Fehling B. Đun sôi cách thủy vài phút. Thấy xuất hiện tủa gạch (Phẩn ứng dương tính với cả hai loài).
3.2.Ị8. Định tính Glycosỉd tìm:
Lấy 10 g được liệu cho vào bình nón dung tích 250 ml. Thêm 100ml nước cất, ngâm ở nhiệt độ phòng 24 giờ. Gạn dịch vào cốc có mỏ, thêm vào bình gạn 5ml dung dịch chì acetat 30%, khuấy đều, để lắng, lọc qua giấy lọc. Chuyển dịch lọc vào bình gạn 100ml, lắc với cloroform 3 lần, mỗi lần 5ml. Gạn lớp cloroform vào cốc có mỏ, dịch gạn phải trong suốt, nếu còn nước phải loại nước bằng Na2S04 khan, chia đều dịch chiết cloroform vào 4 ống nghiệm nhỏ, cô trên nồi cách thuỷ đến khô, cắn còn lại tiến hành làm các phản ứng:
- Phản ứng Libermann: cho vào ống nghiệm chứa cắn lml anhydrid acetic, lắc đều cho tan hết cắn, cho thêm đồng lượng acid sulfuric đặc theo thành ống nghiêm cho phân thành 2 lớp.
Kết quả: Không thấy xuất hiện vòng đỏ tím giữa hai lớp phân cách
(phản ứng âm tính đối với cả 2 loài).
- Phản ứng Bal'jet: cho vào ống nghiêm chứa cắn lml ethanol 90° thêm thuốc thử Baljet vừa mới pha (một phần acid picric 1% - chín phần NaOH
10%).
Kết quả: Không thấy xuất hiện màu vàng da cam (phản ứng âm tính với cả 2 loài).
- Phản ứng Legal: cho vào ống nghiệm chứa cắn lml ethanol, lắc đều cho tan hết cắn, thêm 1 giọt thuốc thử Natri pmssiat 0,5% và 2 giọt NaOH
10%.
Kết quả: Không thấy xuất hiện màu đỏ (phản ứng âm tính với cả 2 loài)
- Phản ứng Keller - Kiliani: cho vào ống nghiệm chứa cắn lml FeCl3 5% trong acid acetic, nghiêng ống nghiêm, cho từ từ acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm.
Nhận x é t: Không có Glycosìd tim trong cả 2 loài cốt toái bổ.