2.4.2.1. Phương pháp xác định độđồng đều khối lượng
Cân riêng biệt 20 đơn vị lấy ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình viên. Không được có quá hai đơn vị có khối lượng chênh lệch 5% so với khối lượng trung bình và không được có đơn vị nào có khối lượng chênh lệch 10% so với khối lượng trung bình viên (Phụ lục 11.3 – Dược điển Việt Nam IV) [2].
2.4.2.2. Phương pháp xác định độđồng đều hàm lượng dược chất
Phép thử độ đồng đều hàm lượng được tiến hành trên 10 đơn vị riêng lẻ lấy ngẫu nhiên. Tiến hành phép thử và đánh giá kết quả (Phụ lục 11.2 – Dược điển Việt Nam IV) [2].
2.4.2.3. Phương pháp thửđộ rã thuốc đạn
Tiến hành theo chuyên luận “Phép thử độ rã của thuốc đạn và thuốc trứng” (Phụ lục 11.5 – Dược điển Việt Nam IV).
Qui định: Thời gian rã của thuốc đạn chế với tá dược béo phải nhỏ hơn 30 phút, với tá dược thân nước phải nhỏ hơn 60 phút [2].
2.4.2.4. Phương pháp xác định khả năng giải phóng hoạt chất từ thuốc đạn
Tiến hành theo phương pháp khuếch tán qua màng bán thấm.
Điều kiện tiến hành:
Thiết bị: Máy thử hoà tan Erweka với thiết kế giỏ quay
Tốc độ khuấy 50 vòng/phút
Môi trường thử: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4
Nhiệt độ 37 ± 0,50C.
Tiến hành:
- Viên thuốc được đặt trong túi bán thấm celophan có diện tích xung quanh 25 cm2, trong túi chứa 3ml dung dịch đệm phosphat 7,4 ở nhịêt độ 37 ± 0,50C, túi
được đặt vào giỏ quay của máy thử hòa tan.
- Sau từng khoảng thời gian 30, 60, 120, 180, 240 phút, lấy chính xác 10 ml dung dịch trong cốc. Lọc dung dịch, pha loãng (nếu cần) và đo quang ở bước sóng 249 nm với mẫu trắng là dung dịch đệm phoshat 7,4.
- Lượng promethazin hydroclorid được giải phóng ra sau các khoảng thời gian xác định được tính dựa vào các mẫu thử lấy ra theo công thức sau:
1 1 n t t i i V Q q q v Trong đó:
Qt : Khối lượng dược chất được giải phóng ở thời điểm t (mg). V : Thể tích môi trường hòa tan (900 ml).
v : Thể tích mẫu thửđã hút (v = 10 ml).
qt : Khối lượng dược chất có trong mẫu thửở thời điểm t: qt Ct5
Ct : Nồng độ dược chất tại thời điểm t.
qi : Khối lượng (mg) dược chất hút ra trong mẫu thử trước đó tại thời điểm i. n : Số lần lấy mẫu tính đến thời điểm t.
- % dược chất giải phóng từ thuốc đạn được tính theo công thức: % DC giải phóng = Qt/Q 100 %
Q : Hàm lượng DC thực có trong một viên đạn - được xác định bằng pp định lượng. - Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần, lấy kết quả trung bình của các thí nghiệm.
2.4.2.5. Định lượng promethazin hydroclorid trong thuốc đạn
2.4.2.5.1. Định lượng PMZ.HCl trong thuốc đạn bằng phương pháp đo quang
Pha dung dịch chuẩn
Cân chính xác một lượng khoảng 50 mg promethazin hydroclorid. Hoà tan lượng này trong 100ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4 được dung dịch gốc có nồng độ khoảng 500 g/ml. Lấy chính xác 1 ml dung dịch gốc và thêm dung dịch
đệm cho vừa đủ 100 ml thu được dung dịch chuẩn có nồng độ khoảng 5 g/ml.
Tiến hành định lượng
Lấy 10 viên đạn, xác định khối lượng trung bình của một viên. Nghiền thuốc
đạn trong cối sứ, cân một lượng thuốc tương ứng 25 mg promethazin hydroclorid cho vào cốc có mỏ dung tích 100 ml, thêm 30 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4
đun cách thủy ở nhiệt độ 600C cho đạn tan hết. Để nguội, lọc vào bình định mức 100ml, rửa cốc và giấy lọc bằng dung dịch đệm, tập trung dịch lọc và dịch rửa vào bình định mức. Thêm dung dịch đệm vừa đủ thể tích, lắc đều. Pha loãng 50 lần trước khi đo mật độ quang.
Đo độ hấp thụ ánh sáng của dung dịch ở bước sóng 249 nm. Cuvet dày 1 cm, mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 7,4.
Mẫu placebo: tiến hành tương tự mẫu thử với viên thuốc đạn không chứa dược chất, để xác định ảnh hưởng của các tá dược đến khả năng hấp thụ quang của dược chất.
Hàm lượng PMZ.HCl trong một viên thuốc đạn được tính theo công thức:
Mc: Khối lượng promethazin hydroclorid trong mẫu chuẩn (mg) Ac: Mật độ quang dung dịch chuẩn
Q: Hàm lượng dược chất có trong một viên thuốc đạn (mg). mtb: Khối lượng trung bình viên
mt: Khối lượng mẫu thử
2.4.2.5.2. Định lượng promethazin hydroclorid trong thuốc đạn bằng HPLC
Qua tham khảo một số tài liệu [15], [20], [37] kết hợp với quá trình khảo sát tách promethazin hydroclorid bằng phương pháp HPLC với thiết bị đã nêu ở mục 2.2, chúng tôi lựa chọn điều kiện sắc ký:
Cột C18: 0,4615cm; 5m.
Pha động: Methanol/dung dịch đệm pH 7 với tỉ lệ 80/20, lọc qua màng cellulose acetat 0,45 m, rồi siêu âm 15 phút. (dung dịch đệm pH 7: K2HPO4 25mM, dùng acid phosphoric điều chỉnh về pH 7)
Tốc độ dòng: 1ml/phút.
Thể tích tiêm mẫu: 20l.
Detector UV, bước sóng 249nm.
Mẫu chuẩn:
Cân chính xác khoảng 50 mg promethazin hydroclorid, hòa tan với 40 ml
đệm pH 7, siêu âm 15 phút cho dược chất tan hoàn toàn, cho vào bình định mức 50ml, bổ sung vừa đủ thể tích. Lấy 1ml dung dịch này pha loãng 25 lần bằng dung dịch đệm pH 7 tạo thành dung dịch có nồng độ 40 g/ml promethazin hydroclorid. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 m.
Mẫu thử:
Cân 10 viên thuốc đạn, xác định khối lượng trung bình. Nghiền viên trong cối sứ, lấy 1 lượng tương ứng với 25 mg promethazin hydroclorid, làm ấm cho tan chảy, pha loãng bằng dung dịch đệm pH 7 vào bình định mức 25 ml. Lọc, bỏ dịch lọc đầu, lấy 1 ml dung dịch lọc pha loãng 25 lần với dung dịch đệm pH 7 được dung dịch thử. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 m.
Hàm lượng promethazin hydroclorid trong một viên thuốc đạn được tính theo công thức:
Mc: Khối lượng promethazin hydroclorid trong mẫu chuẩn (mg) Sc: Diện tích pic dung dịch chuẩn
St: Diện tích pic dung dịch thử
Q: Hàm lượng dược chất có trong một viên thuốc đạn (mg) mtb: Khối lượng trung bình viên
mc: Khối lượng mẫu thử