2.4.1. Phương pháp bào chế
Các mẫu thuốc đạn đều được bào chế theo phương pháp đun chảy đổ khuôn, mỗi viên thuốc chứa 25mg promethazin hydrochorid, sử dụng khuôn thuốc đạn 1g. Tiến hành bào chế thuốc đạn theo các bước sau:
- Chuẩn bị khuôn: rửa sạch, sấy khô, làm trơn khuôn bằng dầu parafin với thuốc đạn sử dụng tá dược PEG, với thuốc đạn sử dụng tá dược Suppocire thì làm trơn khuôn bằng dung dịch xà phòng trong cồn.
- Nghiền promethazin hydrochorid, rây qua rây 250. - Cân dược chất, tá dược, chất diện hoạt theo công thức.
- Với hỗn hợp tá dược PEG 400/PEG 4000: Đun chảy cách thủy tá dược, thêm chất diện hoạt (nếu có). Cho promethazin hydrochorid vào khuấy đều cho đến khi dược chất tan hết. Để nguội đến gần nhiệt độđông đặc rồi đổ khuôn.
- Với tá dược Suppocire: + Đun chảy cách thủy tá dược.
+ Cân promethazin hydrochorid cho vào cối sứ, cho đồng lượng tá dược đã đun chảy trên vào trộn đều.
+ Lượng tá dược đã đun chảy còn lại, thêm chất diện hoạt (nếu có).
+ Phân tán khối bột nhão vào hỗn hợp tá dược còn lại. Để nguội đến gần nhiệt độ đông đặc rồi đổ khuôn.
- Làm lạnh ở nhiệt độ 5-100C cho thuốc đông rắn hoàn toàn, dùng dao cắt phần thuốc thừa, tháo khuôn để lấy viên thuốc.
- Bảo quản viên thuốc đạn trong túi nilon, cho túi vào lọ thủy tinh kín, bảo quản tránh ánh sáng.
2.4.2. Phương pháp đánh giá các tiêu chuẩn chất lượng
2.4.2.1. Phương pháp xác định độđồng đều khối lượng
Cân riêng biệt 20 đơn vị lấy ngẫu nhiên, tính khối lượng trung bình viên. Không được có quá hai đơn vị có khối lượng chênh lệch 5% so với khối lượng trung bình và không được có đơn vị nào có khối lượng chênh lệch 10% so với khối lượng trung bình viên (Phụ lục 11.3 – Dược điển Việt Nam IV) [2].
2.4.2.2. Phương pháp xác định độđồng đều hàm lượng dược chất
Phép thử độ đồng đều hàm lượng được tiến hành trên 10 đơn vị riêng lẻ lấy ngẫu nhiên. Tiến hành phép thử và đánh giá kết quả (Phụ lục 11.2 – Dược điển Việt Nam IV) [2].
2.4.2.3. Phương pháp thửđộ rã thuốc đạn
Tiến hành theo chuyên luận “Phép thử độ rã của thuốc đạn và thuốc trứng” (Phụ lục 11.5 – Dược điển Việt Nam IV).
Qui định: Thời gian rã của thuốc đạn chế với tá dược béo phải nhỏ hơn 30 phút, với tá dược thân nước phải nhỏ hơn 60 phút [2].
2.4.2.4. Phương pháp xác định khả năng giải phóng hoạt chất từ thuốc đạn
Tiến hành theo phương pháp khuếch tán qua màng bán thấm.
Điều kiện tiến hành:
Thiết bị: Máy thử hoà tan Erweka với thiết kế giỏ quay
Tốc độ khuấy 50 vòng/phút
Môi trường thử: 900 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4
Nhiệt độ 37 ± 0,50C.
Tiến hành:
- Viên thuốc được đặt trong túi bán thấm celophan có diện tích xung quanh 25 cm2, trong túi chứa 3ml dung dịch đệm phosphat 7,4 ở nhịêt độ 37 ± 0,50C, túi
được đặt vào giỏ quay của máy thử hòa tan.
- Sau từng khoảng thời gian 30, 60, 120, 180, 240 phút, lấy chính xác 10 ml dung dịch trong cốc. Lọc dung dịch, pha loãng (nếu cần) và đo quang ở bước sóng 249 nm với mẫu trắng là dung dịch đệm phoshat 7,4.
- Lượng promethazin hydroclorid được giải phóng ra sau các khoảng thời gian xác định được tính dựa vào các mẫu thử lấy ra theo công thức sau: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
1 1 n t t i i V Q q q v Trong đó:
Qt : Khối lượng dược chất được giải phóng ở thời điểm t (mg). V : Thể tích môi trường hòa tan (900 ml).
v : Thể tích mẫu thửđã hút (v = 10 ml).
qt : Khối lượng dược chất có trong mẫu thửở thời điểm t: qt Ct5
Ct : Nồng độ dược chất tại thời điểm t.
qi : Khối lượng (mg) dược chất hút ra trong mẫu thử trước đó tại thời điểm i. n : Số lần lấy mẫu tính đến thời điểm t.
- % dược chất giải phóng từ thuốc đạn được tính theo công thức: % DC giải phóng = Qt/Q 100 %
Q : Hàm lượng DC thực có trong một viên đạn - được xác định bằng pp định lượng. - Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần, lấy kết quả trung bình của các thí nghiệm.
2.4.2.5. Định lượng promethazin hydroclorid trong thuốc đạn
2.4.2.5.1. Định lượng PMZ.HCl trong thuốc đạn bằng phương pháp đo quang
Pha dung dịch chuẩn
Cân chính xác một lượng khoảng 50 mg promethazin hydroclorid. Hoà tan lượng này trong 100ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4 được dung dịch gốc có nồng độ khoảng 500 g/ml. Lấy chính xác 1 ml dung dịch gốc và thêm dung dịch
đệm cho vừa đủ 100 ml thu được dung dịch chuẩn có nồng độ khoảng 5 g/ml.
Tiến hành định lượng
Lấy 10 viên đạn, xác định khối lượng trung bình của một viên. Nghiền thuốc
đạn trong cối sứ, cân một lượng thuốc tương ứng 25 mg promethazin hydroclorid cho vào cốc có mỏ dung tích 100 ml, thêm 30 ml dung dịch đệm phosphat pH 7,4
đun cách thủy ở nhiệt độ 600C cho đạn tan hết. Để nguội, lọc vào bình định mức 100ml, rửa cốc và giấy lọc bằng dung dịch đệm, tập trung dịch lọc và dịch rửa vào bình định mức. Thêm dung dịch đệm vừa đủ thể tích, lắc đều. Pha loãng 50 lần trước khi đo mật độ quang.
Đo độ hấp thụ ánh sáng của dung dịch ở bước sóng 249 nm. Cuvet dày 1 cm, mẫu trắng là dung dịch đệm phosphat pH 7,4.
Mẫu placebo: tiến hành tương tự mẫu thử với viên thuốc đạn không chứa dược chất, để xác định ảnh hưởng của các tá dược đến khả năng hấp thụ quang của dược chất.
Hàm lượng PMZ.HCl trong một viên thuốc đạn được tính theo công thức:
Mc: Khối lượng promethazin hydroclorid trong mẫu chuẩn (mg) Ac: Mật độ quang dung dịch chuẩn
Q: Hàm lượng dược chất có trong một viên thuốc đạn (mg). mtb: Khối lượng trung bình viên
mt: Khối lượng mẫu thử
2.4.2.5.2. Định lượng promethazin hydroclorid trong thuốc đạn bằng HPLC
Qua tham khảo một số tài liệu [15], [20], [37] kết hợp với quá trình khảo sát tách promethazin hydroclorid bằng phương pháp HPLC với thiết bị đã nêu ở mục 2.2, chúng tôi lựa chọn điều kiện sắc ký:
Cột C18: 0,4615cm; 5m.
Pha động: Methanol/dung dịch đệm pH 7 với tỉ lệ 80/20, lọc qua màng cellulose acetat 0,45 m, rồi siêu âm 15 phút. (dung dịch đệm pH 7: K2HPO4 25mM, dùng acid phosphoric điều chỉnh về pH 7)
Tốc độ dòng: 1ml/phút.
Thể tích tiêm mẫu: 20l.
Detector UV, bước sóng 249nm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Mẫu chuẩn:
Cân chính xác khoảng 50 mg promethazin hydroclorid, hòa tan với 40 ml
đệm pH 7, siêu âm 15 phút cho dược chất tan hoàn toàn, cho vào bình định mức 50ml, bổ sung vừa đủ thể tích. Lấy 1ml dung dịch này pha loãng 25 lần bằng dung dịch đệm pH 7 tạo thành dung dịch có nồng độ 40 g/ml promethazin hydroclorid. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 m.
Mẫu thử:
Cân 10 viên thuốc đạn, xác định khối lượng trung bình. Nghiền viên trong cối sứ, lấy 1 lượng tương ứng với 25 mg promethazin hydroclorid, làm ấm cho tan chảy, pha loãng bằng dung dịch đệm pH 7 vào bình định mức 25 ml. Lọc, bỏ dịch lọc đầu, lấy 1 ml dung dịch lọc pha loãng 25 lần với dung dịch đệm pH 7 được dung dịch thử. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 m.
Hàm lượng promethazin hydroclorid trong một viên thuốc đạn được tính theo công thức:
Mc: Khối lượng promethazin hydroclorid trong mẫu chuẩn (mg) Sc: Diện tích pic dung dịch chuẩn
St: Diện tích pic dung dịch thử
Q: Hàm lượng dược chất có trong một viên thuốc đạn (mg) mtb: Khối lượng trung bình viên
mc: Khối lượng mẫu thử
2.4.3. Đánh giá độ ổn định của thuốc đạn bào chế
Tiêu chí đánh giá: Hàm lượng promethazin hydroclorid còn lại trong thuốc
đạn.
Bố trí thí nghiệm: Độ ổn định của thuốc đạn được đánh giá vào các thời
điểm và điều kiện sau:
+ Ban đầu: ngay sau khi bào chế.
+ Sau khi đun cách thủy ở nhiệt độ 600C trong vòng 6 giờ.
Xác định hàm lượng promethazin hydroclorid còn lại trong thuốc đạn bằng phương pháp HPLC đã nêu ở mục 2.4.2.5.2.
PHẦN III. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1. Xây dựng đường chuẩn định lượng promethazin hydroclorid trong môi
trường đệm phosphat pH 7,4
- Cân 50 mg PMZ.HCl hòa tan trong khoảng 80ml dung dịch đệm phosphat 7,4. Siêu âm 20 phút để dược chất tan hoàn toàn. Cho vào bình định mức 100 ml, rửa cốc và bổ sung vừa đủ thể tích bằng dung dịch đệm 7,4 được dung dịch có nồng
độ khoảng 500g/ml.
- Sử dụng dung dịch đệm 7,4 pha loãng dung dịch trên thành các dung dịch có nồng độ 2, 4, 6, 8, 10, 12 g/ml.
- Quét phổ dung dịch có nồng độ 10g/ml trong khoảng 200 – 400 nm, mẫu trắng là dung dịch đệm 7,4. Xác định được cực đại hấp thụ tại bước sóng 249 nm.
- Xác định mật độ quang của các dung dịch tại bước sóng 249 nm.
- Kết quảđo quang được thể hiện ở bảng 3.1 và hình 3.1.
Bảng 3.1: Độ hấp thụ quang của dd PMZ.HCl ở các nồng độ khác nhau
Nồng độ (g/ml) 2 4 6 8 10 12 Mật độquang 0,276 0,374 0,480 0,566 0,648 0,738
Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của mật độ quang vào nồng độ
Nhận xét: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Mật độ quang và nồng độ dung dịch promethazin hydroclorid trong môi trường đệm pH 7,4 có quan hệ tuyến tính với nhau theo phương trình y = 0,046 + 0,0999 với R2 = 0,998 (hệ số tương quan xấp xỉ bằng 1). Do đó, trong phạm vi nồng
độ khảo sát có thể sử dụng phương pháp đo quang để định lượng promethazin hydroclorid.
Dung dịch placebo được chuẩn bị theo phương pháp mô tả ở mục 2.4.2.5.1 và tiến hành đo quang ở bước sóng 249 nm. Kết quả mật độ quang của dung dịch thử chứa dược chất và dung dịch placebo trong môi trường đệm pH 7,4 (được xử lí trong cùng điều kiện) tại bước sóng 249 nm được thể hiện trong bảng 3.2.
Bảng 3.2: Kết quả mật độ quang của dung dịch thử chứa DC và dd
placebo trong môi trường đệm pH 7,4 tại bước sóng 249 nm.
STT Mật độ quang của dung dịch thử (At)
Mật độ quang của dung
dịch placebo (Ap) Ap/At
1 0,483 0,004 0,00828 2 0,489 0,003 0,00613 3 0,486 0,003 0,00617 4 0,484 0,004 0,00826 5 0,488 0,004 0,00820 6 0,49 0,004 0,00816 X 0,4867 0,0037 0,00760 SD 0,0028 0,0005
Kết quả: Từ bảng 3.2 cho thấy dung dịch placebo gần như không hấp thụ
mật độ quang tại bước sóng 249 nm: độ hấp thụ của dung dịch placebo < 1% độ hấp thụ của dung dịch chuẩn, chứng tỏ các tá dược khác không làm ảnh hưởng đến độ
hấp thụ của PMZ.HCl trong điều kiện khảo sát. Do đó có thể sử dụng phương pháp
đo quang ở bước 249 nm trong khoảng nồng độ trên đểđịnh lượng PMZ.HCl trong mẫu thử và môi trường hòa tan.
3.2. Thẩm định phương pháp định lượng promethazin hydroclorid bằng phương pháp HPLC phương pháp HPLC
3.2.1. Khảo sát tính thích hợp của hệ thống sắc ký
Chuẩn bị dung dịch mẫu PMZ.HCl có nồng độ khoảng 40 g/ml.
Tiêm mẫu 6 lần qua cột sắc ký với các điều kiện trong mục 2.4.2.5.2, kết quả
về thời gian lưu, diện tích pic được ghi trong bảng 3.3.
Bảng 3.3: Bảng kết quả kiểm tra tính thích hợp của hệ thống sắc ký
STT Thời gian lưu (phút) Diện tích pic (mAU.s)
1 7,651 3925,6 2 7,646 4001,6 3 7,657 3950,2 4 7,658 3987 5 7,655 4100 6 7,664 4088,4 X 7,655 4008,8 SD 0,0062 71,4659 RSD (%) 0,0807 1,7827 Kết luận:
Độ lệch chuẩn tương đối của thời gian lưu và diện tích pic đều < 2%. Điều này chứng tỏ hệ thống sắc ký có tính thích hợp cao, có thể ứng dụng để phân tích mẫu với kết quả tin cậy.
3.2.2. Thẩm định quy trình định lượng
3.2.2.1. Tính đặc hiệu
Pha dung dịch mẫu thử và dung dịch mẫu chuẩn có nồng độ promethazin hydroclorid khoảng 40 g/ml.
Định lượng các dung dịch này bằng phương pháp HPLC với các điều kiện sắc kí trong mục 2.4.2.5.2 thu được sắc ký đồ của mẫu trắng, mẫu thử và mẫu chuẩn.
Kết quả:
Đối với mẫu thử và mẫu chuẩn sắc kí đồ cho một pic với thời gian khoảng 7,7 phút, đó là pic của promethazin hydroclorid.
Đối với mẫu trắng, trên sắc kí đồ không có pic nào xuất hiện trong khoảng thời gian lưu của promethazin hydroclorid. Điều đó chứng tỏ tá dược và dung môi pha động không làm ảnh hưởng đến kết quảđịnh lượng.
Nhận xét: Phương pháp có tính đặc hiệu cao, dược chất promethazin hydroclorid có một pic với thời gian lưu 7,7 phút. Do vậy, có thể định lượng promethazin hydroclorid trong thuốc đạn dựa vào diện tích pic. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.2.2.2. Tính tuyến tính
- Pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ PMZ.HCl là 20, 40, 60, 80, 100 g/ml. - Tiến hành chạy sắc ký với các điều kiện trong mục 2.4.2.5.2, kết quả diện tích pic được ghi trong bảng 3.4 và hình 3.2.
Bảng 3.4: Mối tương quan giữa nồng độ PMZ.HCl với diện tích pic
Nồng độ (g/ml) 20 40 60 80 100
Diện tích pic (mAU.s) 2273,1 4189,9 6086,5 7928,5 9549,3
Hình 3.2: Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của diện tích pic vào nồng độ
Như vậy trong khoảng nồng độ từ 20-100 (g/ml) nồng độ của promethazin hydroclorid tuyến tính với diện tích pic theo phương trình y= 91,455x + 518,16 (R2 = 0,999; xấp xỉ bằng 1), Như vậy có thể dùng phương pháp HPLC để định lượng promethazin hydroclorid trong khoảng nồng độ tuyến tính để hạn chế sai số.
3.2.2.3. Độ lặp lại
Pha dung dịch chuẩn có nồng độ promethazin hydroclorid là 40 g/ml. Pha 6 mẫu độc lập. Tiến hành chạy sắc ký với các điều kiện trong mục 2.4.2.5.2. Mỗi mẫu tiến hành sắc ký 3 lần, giá trị diện tích pic trung bình được ghi trong bảng 3.5.
Bảng 3.5: Kết quả kiểm tra độ lặp lại của phương pháp sắc ký
STT Diện tích pic trung bình (mAU.s)
1 4249,6 2 4214,6 3 4259,1 4 4151,7 5 4174,9 6 4086,5 SD 65,326 RSD 0,0156
Với chương trình sắc ký đã chọn, phương pháp định lượng promethazin hydroclorid có độ lặp lại tốt với độ lệch chuẩn tương đối là 1,5% (< 2%).
3.2.2.4. Độ đúng
Tiến hành xác định độđúng bằng phương pháp thêm chuẩn.
Dùng mẫu thử đã biết nồng độ của promethazin hydroclorid, thêm vào chất chuẩn: 3 mẫu thêm 50%, 3 mẫu thêm 100%, 3 mẫu thêm 150% chất chuẩn so với nồng độđã có trong mẫu thử.
Tiến hành chạy sắc ký với các điều kiện trong mục 2.4.2.5.2, từ diện tích pic xác định nồng độ promethazin hydroclorid, tỉ lệ hồi phục (% lượng chất chuẩn tìm thấy sau khi thêm vào dung dịch thử).
Bảng 3.6: Bảng kết quả kiểm tra độ đúng của phương pháp sắc ký Tỉ lệ chuẩn thêm Hàm lượng mẫu (g/ml)
Lượng chất chuẩn thêm
(g/ml) Tỉ lệ hồi phục (%) Trung bình (%) Thêm Tìm thấy 50% 41,08 20 19,81 99,05 98,67 RSD = 0,35% 41,08 20 19,72 98,6 41,08 20 19,67 98,35 100% 41,08 41,2 40,93 99,34 100,28 RSD = 0,98% 41,08 41,2 41,28 100,19 41,08 41,2 41,74 101,31 150% 41,08 60,8 60,39 99,33 99,83 RSD = 0,75% 41,08 60,8 60,47 99,46 41,08 60,8 61,22 100,69
Nhận xét: Kết quả thu được cho thấy tỉ lệ % tìm lại chất chuẩn tương đối cao, với độ lệch chuẩn tương đối <2%.
3.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của tá dược thuốc đạn đến khả năng giải phóng promethazin hydroclorid từ thuốc đạn promethazin hydroclorid từ thuốc đạn
Ởđây chúng tôi lựa chọn PEG với khối lượng phân tử khác nhau làm tá dược thân nước và Suppocire làm tá dược thân dầu.
Các tỉ lệ tá dược được đưa vào thực nghiệm:
CT1: PEG 400 : PEG 4000 (2:8)
CT2: PEG 400 : PEG 4000 (3:7)
CT3: Suppocire
Bảng 3.7: Công thức thuốc đạn PMZ.HCl với tá dược tính theo 1 viên
Công thức promethazin
hydroclorid (g) PEG 400 (g) PEG 4000 (g) Suppocire (g) CT1 0,025 0,24 0,96 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
CT2 0,025 0,36 0,84
Các mẫu thuốc đạn trên được tiến hành bào chế theo phương pháp đun chảy
đổ khuôn được trình bày ở mục 2.4.1, sau đó tiến hành đánh giá các chỉ tiêu: thể
chất, độ rã, độ đồng đều khối lượng, đồng đều hàm lượng và khả năng giải phóng