2.5.1 Cây dâm bụt
Nguồn gốc
Dâm bụt (vùng ven Bắc Bộ gọi là râm bụt, Nam Bộ gọi là bông bụp, bông lồng đèn, còn có các tên gọi khác mộc cận, chu cận, đại hồng hoa, phù tang, phật tang), (có tên khoa học là Hibiscus rosa-sinensis), là loài cây bụi thƣờng xanh thuộc họ Bông hoặc Cẩm quỳ (Malvaceae), có nguồn gốc Đông Á. Nó thƣờng đƣợc trồng làm cây cảnh tại các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Hoa lớn, màu đỏ sậm nhƣng ít có hƣơng. Nhiều giống, thứ, lai đƣợc tạo ra, với màu hoa khác nhau.
Theo định nghĩa của hệ thống phân loại sinh học thực vật (APG II) thì Dâm Bụt thuộc:
Họ Cẩm Quỳ Malvaceae
Bộ Cẩm Quỳ Malvaces
Phân họ Malvoideae
Chi Dâm Bụt Hibiscus
Loài Hibiscus-rose sinenis L. (Vũ Đình Túy, 2003).
Trang 24
Theo Đỗ Huy Bích và ctv (2004), mô tả:
Cây nhỏ, cao 1-2 m, hoặc cây nhỡ 4-5 m. Thân hình trụ, tròn, nhẵn, màu nâu xám. Lá mọc so le, có cuống dài hình bầu dục, gốc tròn, đầu nhọn, mép có rang to, mặt trên sẵm bóng, mặt dƣới nhạt, lá kèm hình chỉ dài và nhọn. Hoa to, mọc đơn độc ở kẽ lá, có cuống dài, màu đổ, tiểu đài có 6-7 mảnh hình chỉ, đài hợp hình ống, dài gấp 2-3 lần tiểu đài; tràng có 5 cánh mỏng rời nhau, có móng hẹp, nhị nhiều dính liền nhau bởi chỉ nhị rất dài, vƣợt ra ngoài tràng, bầu hình nón hay hình trụ.
(Vnphoto.net)
Hình 2.6: Cây dâm bụt (Hibiscus rosa-sinensis)
Dâm bụt có khả năng sinh trƣởng và phát triển tốt trên nhiều loại đất khác nhau. Đặc biệt có khả năng chịu nóng, chịu hạn ở khu vực miền Trung Việt Nam. Cây dâm bụt dễ trồng và nhân ra diện rộng bởi nó có thể trồng bằng cành.
Sử dụng
Dâm bụt cho năng suất chất xanh 65 tấn/ha/năm và năng suất chất khô lá đạt 9-11 tấn/ha/năm (Nguyễn Xuân Bả, 2006). Tùy theo mục đích sử dụng mà dâm bụt có thể trồng thành thửa để lấy thức ăn cho gia súc hoặc trồng hàng rào nhƣ là cây đa mục tiêu. Dâm bụt có tính ngon miệng cao đối với gia súc nhai lại (trâu, bò, dê và cừu). Gia súc ăn ngay và nhiều khi lần đầu tiếp xúc, đặc biệt dê và cừu. Lá dâm bụt đƣợc xem là nguồn thức ăn bổ sung protein và hydratecarbon hòa tan cho gia súc nhai lại và đặc biệt là tăng quá trình phân giải, sinh tổng hợp protein vi sinh vật dạ cỏ khi nuôi gia súc bằng khẩu phần
Trang 25
giàu xơ nghèo dinh dƣỡng (Lê Đức Ngoan, 2006). Bảng 2.4: Phân tích định tính hóa thực vật của một số giống cây dâm bụt.
Bảng 2.4: Phân tích định tính hóa thực vật của một số giống cây dâm bụt
Thành phần hóa thực vật
Giống cây
Hoa đỏ Hoa hồng Hoa trắng Hoa cam Hoa vàng
Lá Tanins +++ +++ ++ ++ ++ Phlobatanins - - - - - Saponins + + + + + Flavonoids ++ ++ ++ ++ ++ Terpenoids ++ ++ + ++ ++ Cardiac glycosides - - - - - Alkaloids + + + + + Phenol ++ ++ ++ ++ ++ Thân Tanins ++ ++ ++ ++ ++ Phlobatanins - - - - - Saponins + + + + + Flavonoids ++ + ++ ++ ++ Terpenoids - - - - - Cardiac glycosides - - - - - Alkaloids + + + + + Phenol +++ +++ +++ +++ +++ Rễ Tanins ++ ++ ++ ++ ++ Phlobatanins - - - - - Saponins + + + + + Flavonoids + + + + + Terpenoids - - - - - Cardiac glycosides - - - - - Alkaloids + + + + + Phenol ++ ++ ++ ++ ++
Ghi chú:+++ = Có nhiều; ++ =Có trung bình; + =Cóít ; - = Rất hạn chế (Nguồn: Rena Patel et al, 2012)
Trang 26
2.5.2 Cỏ voi
(www.pgrvietnam.org.vn)
Hình 2.7: Cỏ voi
Cỏ voi thuộc họ hoà thảo có tên khoa học là Pennisetum purpureum. Cỏ voi có nguồn gốc ở Nam Phi, phân bố rộng ở các nƣớc nhiệt đới trên thế giới. Ở Việt Nam đƣợc gọi là cỏ Huế vì lần đầu tiên lấy giống ở đây đƣa ra Bắc (1908). Hiện nay, cỏ voi đƣợc trồng ở nhiều nơi. Đây là một trong những giống cỏ cho năng suất chất xanh cao nhất trong điều kiện thâm canh ở Việt Nam.
Là cỏ lâu năm, thân đứng có thể cao từ 4 - 6 m, nhiều đốt, những đốt gần gốc thƣờng ra rễ, hình thành cả thân ngầm phát triển thành bụi to, lá hình dải có mũi nhọn ở đầu, nhẵn, bẹ lá dẹt ngắn và mềm có khi dài tới 30 cm, rộng 2 cm. Chùm hoa hình trùy giống đuôi chó màu vàng nhạt.
Cỏ voi chịu đƣợc khô hạn, giai đoạn sinh trƣởng chính trong mùa hè khi nhiệt độ và ẩm độ cao. Sinh trƣởng chậm trong mùa đông và mẫn cảm với sƣơng muối. Nhiệt độ thích hợp nhất cho sinh trƣởng từ 25- 40oC. Thích hợp nhất với đất giàu dinh dƣỡng, pH = 6 -7, đất không bùn, úng.
2.5.3 Thức ăn hỗn hợp
Thức ăn hỗn hợp dùng trong thí nghiệm là thức ăn Hi-pro dạng viên dùng cho bò thịt của công ty Tidaphaco.
Trang 27
Chƣơng 3: PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1 Địa điểm và thời gian nghiên cứu
- Đề tài đƣợc thực hiện tại Phòng Chăn nuôi Tiên tiến - E103, Bộ môn Chăn nuôi, Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trƣờng Đại Học Cần Thơ.
- Dịch dạ cỏ dùng để thí nghiệm in vitro đƣợc lấy trên cơ thể của bò, đã đƣợc mổ lỗ dò tại lò mổ Hoàng Minh, xã Đông Thành, thị xã Bình Minh, tỉnh Vĩnh Long.
- Đề tài đƣợc thực hiện từ tháng 8/2014 đến tháng 11/2014.
3.2 Phƣơng tiện nghiên cứu
3.2.1 Dụng cụ dùng để lấy dịch dạ cỏ
- Bình giữ nhiệt:dùng để giữ ấm, khi lấy dịch dạ cỏ của bò xong sẽ đƣợc trữ trong bình giữ nhiệtđể giữ cho nhiệt độ của dịch dạ cỏ không bị thay đổi nhiều khi chuyển về phòng thí nghiệm.
- Bơm tiêm 50 ml/cc dùng để hút dịch ra khỏi dạ cỏ thông qua ống nhựa dẻo đƣợc đặt trong ống uPVC.
- Ống uPVC:đƣờng kính 18 mm. - Ống nhựa dẻo: đƣờng kính 6 mm.
3.2.2 Thiết bị dùng để thí nghiệm
- Keo ủ tối màu: dùng để ủ thực liệu trong 24 giờ.
-Bình đo thể tích khí: dùng để đo thể tích khí sinh ra khi ủ thực liệu. - Bồn ủ: đƣợc điều chỉnh nhiệt độ ổn định 38oC.
- Khung inox: dùng để cố định keo ủ. - Máy Mettler toledo để đo pH
- Máy đo nồng độ CH4 Triple Plus + IR.
- Một số dụng cụ khác trong phòng thí nghiệm: ống đong, bình tia, quặng thủy tinh,…
3.3 Phƣơng pháp tiến hành thí nghiệm
Thí nghiệm nghiên cứu ảnh hƣởng của các mức bổ sung lá dâm bụt với khẩu phần cơ bản cỏ voi lên khả năng sinh khí và các tỷ lệ tiêu hóa bằng phƣơng pháp in vitro với dịch dạ cỏ bò.
Trang 28
3.3.1 Mục tiêu thí nghiệm
Bằng phƣơng pháp in vitro đánh giá tỷ lệ tiêu hóa và lƣợng khí sinh ra của các khẩu phần thí nghiệm.
3.3.2 Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm đƣợc bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức và 5 lần lặp lại tổng đơn vị thí nghiệm là 5×5 =25.
Bảng 3.1: Thành phần phần trăm thực liệu thí nghiệm
Thực liệu Nghiệm thức (%)
Đối chứng Dâm bụt 5% Dâm bụt 10% Dâm bụt 15% Dâm bụt 20%
Dâm bụt 0,0 5,0 10,0 15,0 20,0
TĂHH 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0
Cỏ voi 80,0 80,0 80,0 80,0 80,0
Tổng 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
Ghi chú: TĂHH là thức ăn hỗn hợp bổ sung trong khẩu phần.
+ Nghiệm thức 1 (NT1): 0% Dâm bụt + 20% TĂHH + 80% cỏ Voi.
+ Nghiệm thức 2 (NT2): 5% Dâm bụt + 15% TĂHH + 80% cỏ Voi.
+ Nghiệm thức 3 (NT3): 10% Dâm bụt + 10% TĂHH + 80% cỏ Voi.
+ Nghiệm thức 4 (NT4): 15% Dâm bụt + 5% TĂHH + 80% cỏ Voi.
+ Nghiệm thức 4 (NT4): 20% Dâm bụt + 0% TĂHH + 80% cỏ Voi.
Bảng 3.2: Sơ đồ bố trí nghiệm NT Lặp lại ĐC 5% DB 10% DB 15% DB 20% DB 1 - - - - - 2 - - - - - 3 - - - - - 4 - - - - - 5 - - - - -
Ghi chú: NT: nghiệm thức, ĐC: đối chứng, DB: dâm bụt.
3.3.3 Các chỉ tiêu theo dõi
- Thành phần dƣỡng chất thức ăn trong các thí nghiệm đƣợc phân tích theo tiêu chuẩn AOAC (1990).
Trang 29
- pH dung dịch trƣớc và sau khi ủ thực liệu.
- Tổng lƣợng khí sinh ra (ml) ở các mốc thời gian: 0 giờ, 3 giờ, 6 giờ, 9 giờ, 12 giờ, 24 giờ.
- Nồng độ % CH4 thời điểm 24 giờ và tỉ lệ tiêu hóa vật chất khô DMD.
3.3.4 Tiến hành thí nghiệm
3.3.4.1 Định lượng tanin trong lá dâm bụt
Nguyên lý: Tanin là hợp chất khử khi bị oxi hóa bởi Kalipermanganat trong môi trƣờng axit với chất chỉ thị Indigocarminsex tạo thành khí cacbonic và nƣớc đồng thời làm mất màu xanh của Indigocarmin theo phản ứng sau:
(CHO)n + KMnO4 → CO2 + H2O
3.3.4.2 Thí nghiệm in vitro
Bước 1: Cân mẫu thức ăn cho vào keo ủ tối màu, cẩn thận tránh làm vƣơng vảy mẫu.
Bước 2: Pha dung dịch đệm. Dung dịch đệm đƣợc sử dụng trong thí nghiệm theo mô tả của Tilley and Terry (1963).
Dung dịch đệm sau khi pha xong đƣợc sục khí CO2 cho đến khi chuyển sang trong suốt. Sau khi sục khí xong, để thùng chứa dung dịch vào bồn ủ khoảng 15 phút, nhiệt độ trong bồn đƣợc giữ ổn định ở 38oC trƣớc khi sử dụng để tạo nhiệt độ thích hợp cho VSV trong dạ cỏ.
Bảng 3.3: Lƣợng cân các hóa chất trong 1 lít dung dịch đệm
Bước 3: Lấy dịch dạ cỏ. Dịch dạ cỏ đƣợc lấy thông qua lỗ dò của bò, dịch dạ cỏ đã lấy đƣợc đựng trong bình giữ nhiệt để giữ ấm và chuyển ngay về phòng thí nghiệm. Tại đây dịch dạ cỏ đƣợc lọc qua 4 lớp vải muslin vào bình thủy tinh tối màu, sau đó đem đi sục khí CO2 rồi đậy kín tạo môi trƣờng yếm
STT Hóa chất Lƣợng cân (g/lít) 1 NaHCO3 9.80 2 KCl 0.57 3 CaCl2 0.04 4 Na2HPO4.12H2O 9.30 5 NaCl 0.47 6 MgSO4.7H2O 0.12 7 Cystein 0.25
Trang 30
khí và ủ ấm ở nhiệt độ 38oC trƣớc khi dùng để thực hiện thí nghiệm. Dựa vào số lƣợng đơn vị thí nghiệm và lƣợng thực liệu khi đem ủ là bao nhiêu từ đó ta tính đƣợc lƣợng dạ cỏ cần dùng trong thí nghiệm. Đối với 1gDM thì cần 20 ml dịch dạ cỏ.
Bước 4: Trộn dịch dạ cỏ đã lấy vào dung dịch đệm, trƣớc khi cho hỗn hợp dịch dạ cỏ và dung dịch đệm vào keo ủ chúng ta cần khuấy đều để cho lƣợng VSV phân bố đều. Dùng ống đong, đong 400 ml hỗn hợp dịch dạ cỏ và dung dịch đệm cho vào keo ủ đã có sẵn 4gDM mẫu đã cân, tránh để mẫu dính trên thành keo ủ, đậy kín nắp keo ủ, dùng đất sét làm kín xung quanh kẽ hở giữa nắp keo và miệng keo ngăn không cho không khí đi vào cũng nhƣ khí thoát ra ngoài ảnh hƣởng đến kết quả thí nghiệm.
Dùng ống nhựa loại 2.5 x 4 mm, chiều dài 1m nối keo ủ mẫu với bình đo thể tích khí sinh ra thông qua 2 ru ngoài của ống đƣợc vặn kính hoàn toàn vào 2 nắp của keo ủ và keo đo khí.
Dùng bơm tiêm 50 ml/cc lấy không khí ra khỏi hệ thống thông qua van 3 ngã đƣợc nối vào ống nhựa sao cho mực nƣớc trong bình tia khi đó dâng lên ở mức 100 ml, ngƣng lấy không khí, khóa van ngăn không cho không khí đi vào và đảm bảo khí lƣu thông đƣợc giữa keo ủ và bình đo thể tích khí. Sắp xếp tất cả các keo ủ mẫu vào khung inox cho vào bồn ủ, nhiệt độ ủ đƣợc điều chỉnh ở 38ºC, tiến hành ủ và theo dõi lƣợng khí sinh ra tƣơng ứng với mực nƣớc hạ xuống trong bình đo thể tích khí sau mỗi 3 giờ trong 24 giờ.
pH đƣợc đo bằng pH điện tử: dịch dạ cỏ sau khi lấy cho vào bình giữ nhiệt, sau đó mang về phòng thí nghiệm lọc qua giấy lọc muslin 4 lớp và đo pH ngay.
Bước 5: Tính tỷ lệ tiêu hóa. Mẫu sau khi ủ 24 giờ đem đi lọc bằng túi vải đã đƣợc sấy ở 650C và xác định trọng lƣợng. Mẫu sau khi lọc mang đi sấy ở 1050C cho đến trọng lƣợng không đổi.
Dƣỡng chất trƣớc khi ủ - Dƣỡng chất sau khi ủ Dƣỡng chất trƣớc khi ủ
× 100% TLTH (%) =
Trang 31
Hình 3.1 Keo ủ và bình đo thể tích Hình 3.2 Lọc dịch dạ cỏ
Hình 3.3 Đo pH Hình3.4 Ủ thực liệu
Trang 32
3.4 Phƣơng pháp xử lý thống kê
Số liệu thô đƣợc nhập vào bảng tính Microsoft Excel 2010. Sau đó đƣợc xử lý thống kê bằng phƣơng pháp phân tích phƣơng sai (ANOVA) theo mô hình tuyến tính tổng quát (General Linear Model) trên phần mềm Minitab 16. Khi có sự khác biệt giữa các nghiệm thức sẽ dùng phép thử Tukey để tìm sự khác biệt từng cặp nghiệm thức.
Trang 33
Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 Thành phần hóa học của thức ăn trong thí nghiệm
Bảng 4.1: Thành phần hóa học thức ăn trong thí nghiệm (%DM)
STT Thực liệu DM OM NDF Ash CP Tanin 1 Cỏ voi 18,1 90,3 54 9,70 9,75 -
2 TĂHH 78,1 - - - 15 -
3 Dâm bụt 18,8 87,7 27,8 12,3 16,4 9,02
Ghi chú: TĂHH là thức ăn hỗn hợp bổ sung trong khẩu phần.
Qua bảng 4.1 cho thấy, cỏ voi có phần trăm DM và phần trăm CP là 18,1% và 9,75% thấp hơn so với kết quả của Trƣơng Văn Hiểu (2014) có DM và CP là 18,4% và 10,2% và cũng thấp hơn kết quả của Gohl (1998) có DM và CP là 19,5% và 9,7%. Phần trăm OM của cỏ voi là 90,3% thấp hơn kết quả của Trƣơng Văn Hiểu (2014) có OM là 90,4%. Phần trăm NDF và Ash của thí nghiệm là 54% và 9,75% cao hơn kết quả của Trƣơng Văn Hiểu (2014) có phần trăm NDF và Ash là 53,3% và 9,63%.
Thức ăn hỗn hợp dùng trong thí nghiệm là thức ăn Hi-pro dạng viên dùng cho bò thịt của công ty Tidaphaco, thành phần hóa học nhƣ nguồn của nhà sản xuất.
Lá dâm bụt phân tích đƣợc có phần trăm tanin là 9,02% cao hơn so với kết quả của Ayeni và Yahaya (2010) có phần trăm tanin là 8,40%.
Phần trăm DM của lá dâm bụt là 18,8% cao hơn kết quả của Viện nghiên cứu quốc gia (1995) có DM là 18,5%. Phần trăm CP lá dâm bụt là 16,4% thấp hơn so với kết quả Viện Chăn nuôi quốc gia có phần trăn CP là 18,37% và cũng thấp hơn so với kết quả của Nguyễn Xuân Bả (2006) có phần trăm DM và CP là 20,9% và 18,7%. Phần trăm NDF và Ash của lá dâm bụt là 27,8% và 12,3% cao hơn so với kết quả của Nguyễn Xuân Bả (2006) có phần trăm NDF và Ash là 22,5% và 12,0%.
Qua bảng thành phần hóa học thức ăn trong thí nghiệm cho thấy, kết quả có sự chênh lệch so với các kết quả nghiên cứu trƣớc đó, nhƣng sự chênh lệch này là không quá lớn đó có thể là do tuổi, giống cây trồng, mùa vụ và đặc điểm đất trồng của thức ăn làm thí nghiệm khác nhau.
Trang 34
4.2 Thí nghiệm in vitro
Bảng 4.2:Ảnh hƣởng của lá dâm bụt lên sự sinh khí (ml/gDM)
NT ĐC BD 5% DB 10% DB 15% DB 20% P SEM 24 giờ 107,00a 106,60a 106,80a 83,00b 79,00b 0,01 1,256
Các chữ cái a, b, c khác nhau trên cùng một cột là khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05). NT: Nghiệm thức, ĐC: đối chứng, DB: dâm bụt
Hình 4.1 Biểu đồ biểu thị lƣợng khí sinh ra thời điểm 24 giờ
Qua bảng 4.2 và hình 4.1 cho thấy, khi bổ sung các mức độ lá dâm bụt khác nhau vào khẩu phần thì tổng lƣợng khí sinh ra chỉ khác biệt có ý nghĩa thống kê ở nghiệm thức dâm bụt 15% và 20%. Kết quả này phù hợp với kết quả của Trần Thị Thúy (2012) khi bổ sung bánh dầu bông vải chứa tanin vào khẩu phần làm giảm lƣợng khí mêtan sinh ra và cũng phù hợp với kết quả của