Kỹ thuật xác định tỷ lệ tiêu hóa ở in vivo đƣợc áp dụng rộng rãi hiện nay là thu gom toàn bộ lƣợng thức ăn ăn vào và lƣợng phân thải ra hàng ngày hoặc sử dụng chất chỉ thị trộn vào thức ăn cho gia súc ăn sau đó xác định nồng độ chất chỉ thị trong phân để tính tỷ lệ tiêu hóa. Kỹ thuật ghi nhận và lấy mẫu thức ăn ăn vào và phân thải ra hàng ngày đòi hỏi có nhiều công lao động, thời gian và chi phí thức ăn.
Nhƣng kỹ thuật này đƣợc chấp nhận cao dùng để xác định tỷ lệ tiêu hóa, tính năng lƣợng trao đổi của thức ăn và đƣợc xem nhƣ là kỹ thuật nền tảng để đánh giá các kỹ thuật khác.
2.2.2 Đánh giá chất lƣợng thức ăn thô bằng tỷ lệ tiêu hóa in vitro
Sự tiêu hóa thức ăn ở gia súc nhai lại có thể phân chia ra làm hai giai đoạn chính là sự tiêu hóa sinh học diễn ra ở dạ cỏ - dạ tổ ong và sự tiêu hóa hóa học diễn ra ở dạ múi khế - ruột non, mặc dù có một phần tiêu hóa xảy ra ở ruột sau nhƣng không đáng kể (Omed el at. 2002). Phỏng theo nguyên lý này, kỹ thuật xác định tỷ lệ tiêu hóa ở in vitro đƣợc chia ra làm hai giai đoạn, giai đoạn đầu tiên là tiêu hóa với hệ VSV dạ cỏ và giai đoạn tiêu hóa thứ hai là với pepsin hoặc sự tẩy rửa của dung dịch tẩy trung tính (Tilley và Terry, 1963). Tuy nhiên kỹ thuật này cần sử dụng nhiều loại hóa chất làm nguồn dƣỡng chất cho VSV phát triển còn khan hiếm và đắt tiền, đồng thời phải mổ lỗ dò để lấy dịch dạ cỏ làm nguồn VSV. Do vậy, kỹ thuật tiêu hóa in vitro truyền thống cần đƣợc nghiên cứu và cải tiến.