Phương pháp xác ựịnh tỷ lệ lợn con mắc bệnh phân trắng lợn con
- Tiến hành theo dõi thường xuyên, quan sát nền chuồng, sàn chuồng, kiểm tra từng cá thể xem lợn con có mắc phân trắng, hội chứng tiêu chảy và các bệnh khác không.
- Dựa vào các ựặc ựiểm sau ựể nhận biết lợn con có mắc hội chứng tiêu chảy
+ Bệnh phân trắng lợn con: Thường sảy ra ở lợn mới sinh ựến 21 ngày tuổi, có con mắc ngay từ những giờ ựầu sau khi sinh (từ 2 ựến 3 giờ) và muộn hơn có khi ựến 4 tuần tuổi.
*Triệu chứng : lợn xù lông, gầy còm, suy kiệt, ựầu xương hông nhô ra, phân chuyển từ màu xám trong sang màu trắng hoặc phân tự do chảy ra.
Sau khi ựã theo dõi và ựiều trị chúng ta ghi chép vào sổ nhật ký, ghi rõ từng giống lợn, từng con (ựược ựánh dấu theo số), số nái, nhóm tuổi, ô chuồng, ngày tháng bị bệnh. Từ ựó ta dự ựoán ra các nguyên nhân bị bệnh và một số vấn ựề cần lưu ý khi ta kết thúc thắ nghiệm.
Sè lĩn con mớc PTLC
Tũ lỷ mớc PTLC = x 100
Sè con theo dâi
Phương pháp xét nghiệm một số chỉ tiêu huyết học của lợn bệnh
đối tượng cần xét nghiệm: 10 mẫu máu lợn bệnh và 10 mẫu máu lợn ựối chứng cho mỗi nhóm lợn.
Vị trắ lấy máu: Vịnh tĩnh mạch cổ của lợn thắ nghiệm. Sau khi lấy ựược máu cho vào dụng cụ bảo quản có chất chống ựông rồi ựưa về phòng xét nghiệm các chỉ tiêu huyết học của máu.
Sử dụng máy ựếm huyết học tự ựộng Celdyn -3700 (CD-3700)
Nguyên lý: Máy sẽ tách riêng các dòng tế bào theo kắch thước tế bào, có nhân hay không có nhân, theo hình dạng nhân... đếm trên toàn bộ ống mẫu máu xét nghệm mà không cầm tách hay pha loãng mẫu.
Chúng tôi tiến hành nghiên cứu một số chỉ tiêu sinh lý máu như sau: + Số lượng hồng cầu (RBC, triệu/ộl)
+ Hàm lượng huyết sắc tố ( HGB, g%) + Tỷ khối huyết cầu (HCT, %)
+ Thể tắch trung bình hồng cầu (MCV, ộm3 )
+ Lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH, pg) + Nồng ựộ huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCHC, %)
+ Số lượng bạch cầu (WBC, nghìn/ ộl) và công thức bạch cầu (%)
Phương pháp giải phẫu bệnh học
* Phương pháp mổ khám toàn diện
Quan sát từ ngoài vào trong, kiểm tra từng cơ quan riêng biệt, ghi lại những biến ựổi từ bên ngoài vào bên trong vào biên bản mổ khám.
+ Kiểm tra các dấu hiệu ngoài da, xoang ngực, xoang bụng, ghi lại kết quả vào biên bản mổ khám.
* Phương pháp lấy bệnh phẩm
Dùng kéo cắt lấy một số bộ phận mang bệnh tắch ựặc trưng ở cơ quan tiêu hóa như mẫu gan, ruột (khoảng 3 cm) rồi cho vào lọ chứa formol 10%.
* Phương pháp làm tiêu bản tổ chức
- Rửa bệnh phẩm: sau khi ựã dùng dung dịch formol 10%, cố ựịnh, lấy bệnh phẩm ra, cắt thành từng miếng ựánh số thứ tự ựể tránh nhầm lẫn, rồi ựem rửa nước từ 12 Ờ 24 giờ (dưới dòng nước nhẹ) ựể trôi hết formol.
- Rút nước: bệnh phẩm rửa xong, lấy giấy lọc thấm nhẹn sau ựó cho vào hệ thống cồn ethylic với thời gian:
Cốc 1: cồn 700 từ 2- 4 giờ Cốc 3: cồn 1000 từ 4 Ờ 6 giờ Cốc 2: cồn 1000 từ 4- 6 giờ Cốc 4: cồn 1000 ựộ từ 4 Ờ 6 giờ Thời gian có thể thay ựổi tùy theo miếng tổ chức to hay nhỏ.
- Làm xong: ta lấy miếng tổ chức ra khỏi cồn, thấm nhẹ trên giấy lọc, rồi cho vào hệ thống cốc ựựng xylen.
Cốc xylen 1: 2 Ờ 4 giờ Cốc xylen 2: 2 Ờ 4 giờ Cốc xylen 3: 2 - 4 giờ
Thời gian cũng tùy theo miếng tổ chức to nhỏ có thể thay ựổi. Sau khi cho ựi qua lần lượt 3 cốc xylen, miếng tổ chức như ựường phèn là ựược.
Tẩm parafin: hệ thống tẩm parafin gồm:
Cốc 1 : Parafin + xylen theo tỷ lệ 1 : 1 từ 2 Ờ 12 giờ Cốc 2: Parafin từ 4 Ờ 6 giờ ở 560 C
Cốc 3: Parafin từ 4 Ờ 6 giờ ở 560 C Cốc 4: Parafin từ 4 Ờ 6 giờ ở 560 C
- đúc Block: chẩn bị ựầy ựủ dụng cụ, khuân giấy parafin dùng ựể ựổ Block cần ựược lọc kỹ trước khi ựúc, khi ựổ parafin phải nóng chảy hoàn toàn nhưng nhiệt ựộ không quá cao sẽ ảnh hưởng ựến chất lượng tiêu bản.
- Cắt và dán mảnh: cắt miếng tổ chức trên máy Microtocom với ựộ dày 3 Ờ 4 micromet. Sau ựó, ựem dán lên lam kắnh, dùng kim tãi tổ chức cho phẳng (phiến kắnh ựể dán tổ chức phải sạch, không bị xước, không mốc).
- Nhuộm tiêu bản:
Dùng thuốc nhuộm Hematoxylin ựể nhuộm nhân tế bào.
Thuốc nhuộm Eosin dùng ựể nhuộm nguyên sinh chất của tế bào.
* Các bước nhuộm tiêu bản.
+ Tẩy parafin: cho tiêu bản lần lượt qua 3 lọ xylen mỗi lọ ựể khoảng 3 Ờ 5 phút. Khi cho tiêu bản qua lọ phải chú ý nhắc lên, nhắc xuống cho tan hết parafin, dùng vải màn sạch lau sạch parafin xung quanh miếng tổ chức.
+ Tẩy xylen: dùng cồn Ethylic cho tiêu bản qua 3 cốc ựựng cồn Ethylic: Cốc 1 : cồn 900 từ 3 Ờ 5 phút
Cốc 2 : cồn 100 từ 3 Ờ 5 phút Cốc 3: cồn 1000 từ 3 Ờ 5 phút
+ Nhuộm Hematoxylin: khi tiêu bản ựi qua 3 cốc cồn tuyệt ựối, ngâm tiêu bản trong dung dịch Hematoxylin khoảng 10 phút. Nếu tiêu bản bắt màu nhạt có thể nhúng nhanh tiêu bản qua NaCO3 1 %. Nếu tiêu bản ựậm và có thể nhúng nanh qua cồn Ờ HCl 1%.
Sau khi ựiều chỉnh màu, rửa sạch tiêu bản bằng nước cất.
+ Nhuộm Eosin: cho tiêu bản ựã nhuộm Hematoxylin vào dung dịch. Eosin khoảng 3 Ờ 5 phút, tùy theo chất lượng thuốc nhuộm và ựộ dày cơ bản. Có thể ựiều chỉnh bằng 1- 2 giọt axit axetic. Rửa tiêu bản bằng nước cất 1 Ờ 2 phút.
+ Tẩy nước: ngâm tiêu bản vào cồn 900 từ 2 Ờ 3 phút.
+ Làm trong: khi ựã hút nước, cho tiêu bản ựi qua 2 lọ xylen từ 1 Ờ 2 phút
+ Gắn lamen: quan sát tiêu bản dưới kắnh hiển vi quang học với ựộ phóng ựại
10 x 15 và 20 x 15 ựọc và ghi lại kết quả, chụp ảnh tiêu bản dán nhãn lên tiêu bản.
Phương pháp xử lý số liệu
Sau khi thu thập số liệu, tổng kết sơ bộ ựược xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học với các tham số và công thức sau:
- Sè trung bừnh: X = n xi ∑ - ậé lỷch chuÈn: Sx = 1 ) ( − − ∑ n x xi
- Sai sè cựa sè trung bừnh
mx = 1 − ổ n S n≤30; mx = 1 − ổ n S n≥30
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN