Vaccine là chế phẩm sinh học làm tăng cường miễn dịch chống lại một căn bệnh cụ thể. Một vaccine điển hình có chứa một số lượng nhỏ nhân tố tương đồng với mầm bệnh. Nhân tố này gọi là kháng nguyên. Kháng nguyên kích thích hệ thống miễn dịch của cơ thể để nhận diện nó như một vật ngoại lai, cơ thể tiêu diệt vật ngoại lai này và cơ thể cũng “nhớ” nó để mà hệ miễn dịch có thể nhận diện nó dễ dàng hơn và tiêu diệt mầm bệnh khi gặp lần sau.
Vaccine được sản xuất từ mầm bệnh gây ra bệnh mà ta muốn phòng. Vaccine có thể từ các vi sinh vật chết, hoặc được làm yếu đi hoặc các sản phẩm tinh khiết từ các vi sinh vật. Có một số loại vaccine đang được sử dụng, hoặc chỉ mới trong giai đoạn nghiên cứu. Các loại vaccine này đại diện cho những chiến lược khác nhau, nhằm giảm nguy cơ nhiễm bệnh, trong khi tạo được đáp ứng miễn dịch có lợi cho cơ thể. Đáp ứng miễn dịch là một phản ứng của cơ thể tạo được bảo hộ chống lại mầm bệnh. Đáp ứng miễn dịch tạo ra kháng thể gọi là miễn dịch dịch thể. Đáp ứng miễn dịch do các tế bào có vai trò tiêu diệt mầm bệnh gọi là miễn dịch tế bào (trích dẫn Võ Thị Trà An và Võ Bảo Ngọc, 2011).
2.8.2 Vaccine Bal-IBD B38 của hãng Bestar, Singapore dùng phòng bệnh Gumboro
Chỉ định
Vaccine được khuyến cáo chủng ngừa cho gà khoẻ mạnh. Nên kiểm tra và xác định tình trạng miễn dịch của đàn gà trước khi chủng ngừa. Chủng ngừa vaccine khi kháng thể thụ động (kháng thể mẹ truyền) đã giảm thấp.
Hướng dẫn sử dụng
Ngưng pha thuốc trong nước uống 48 giờ trước khi chủng ngừa. Sau khi nước vaccine đã hết thì không được pha bất kỳ thuốc nào vào nước uống 24 giờ sau đó. Nước pha phải xử lý sạch triệt để trước khi sử dụng, không được dùng các loại thuốc sát trùng trong quá trình làm sạch.
Pha lọ vaccine 500 liều với 3,75 lít nước. Tránh ánh sáng mặt trời chiếu vào vaccine.
Không được chủng ngừa vaccine trong vòng 21 ngày trước khi giết mổ. Nhiệt độ bảo quản 2-60C, tránh đông đá.
Hình 2.6 Vaccine nhƣợc độc Gumboro Bal – IBD B38
Chƣơng 3 PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
3.1 Nội dung
- Theo dõi tình trạng sức khoẻ của đàn gà sau khi tiêm vaccine.
- Đánh giá khả năng bảo hộ của vaccine Gumboro BAL-IBD B38 (Bestar- Singapore) đối với giống gà Tàu vàng.
- Theo dõi tốc độ tăng trưởng của gà qua các giai đoạn.
3.2 Phƣơng tiện thí nghiệm
3.2.1 Thời gian và địa điểm
- Thời gian thực hiện đề tài: tháng 07/2013 đến tháng 11/2013. - Địa điểm thí nghiệm:
Gà thí nghiệm được nuôi tại trại thực nghiệm Ba Hoàng, phường Thới An Đông, Quận Bình Thủy, Thành Phố Cần Thơ.
Các mẫu huyết thanh gà được xét nghiệm tại phòng thí nghiệm Bệnh truyền nhiễm Bộ Môn Thú Y, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ.
3.2.2 Đối tượng thí nghiệm
Gà được nuôi lúc 1 ngày tuổi thuộc giống gà Tàu vàng. Số lượng gà thí nghiệm là 63 con.
3.2.3 Vật liệu thí nghiệm Vật liệu và dụng cụ Vật liệu và dụng cụ
Ống tiêm y tế 1ml, 3ml, găng tay, khẩu trang, cân, sổ ghi chép, viết, ống nghiệm, thùng trữ lạnh, máy ly tâm, eppendorf, micropipet, kéo, parafilm,...
Mẫu vật và sinh phẩm
Mẫu huyết thanh gà thí nghiệm.
Vaccine phòng bệnh đậu gà, vaccine phòng bệnh cúm gia cầm, vaccine phòng bệnh Newcastle, vaccine tụ huyết trùng gia cầm, vaccine nhược độc phòng bệnh Gumboro BAL-IBD do Bestar Laboratories PTE LTD Singapore sản xuất.
Dung dịch sinh lý 0,85%, nước cất, ELISA kit (USA) do công ty Thịnh Á phân phối
Thành phần bộ kit:
STT Thành phần Số lƣợng
1 Đĩa 96 giếng đã hấp phụ kháng nguyên 5 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2 Đối chứng dương 1,9 ml
3 Đối chứng âm 1,9 ml
4 Conjugate 50 ml
5 Dung dịch pha loãng mẫu 253 ml
6 Dung dịch TMB 60 ml
7 Dung dịch Stop 60 ml
3.3 Phƣơng pháp tiến hành
3.3.1 Phương pháp nuôi gà thí nghiệm
Nhiệt độ là yếu tố cơ bản ảnh hưởng đến hiệu quả của giai đoạn nuôi khởi động trong 8-10 ngày đầu tiên, gà con rất mẫn cảm với nhiệt độ khả năng điều tiết thân nhiệt của gà con rất kém. Để gà con sinh trưởng và phát triển tốt thì trong giai đoạn úm cần chiếu sáng 24/24h. Sử dụng chụp úm bằng kim loại có bóng đèn tròn 75W (2 đèn/100 gà con). Xung quanh chuồng được che kín tránh mưa tạt, gió lùa.
Gà được cho ăn uống tự do, sử dụng thức ăn C225 và C235 của công ty Proconco (Pháp), bổ sung thêm Bcomplex, vitamin C, Vimecox phòng bệnh cầu trùng.
Mật độ nuôi:
1 ngày đến 2 tuần tuổi: 50 con/m2 2 tuần đến 3 tuần tuổi: 35 con/m2 3 tuần đến 4 tuần tuổi: 30 con/m2 4 tuần đến 5 tuần tuổi: 25 con/m2 5 tuần đến 6 tuần tuổi: 20 con/m2 6 tuần đến 7 tuần tuổi: 15 con/m2
Quy trình phòng bệnh chung
Trong quá trình thí nghiệm, gà thí nghiệm được phòng đầy đủ các bệnh theo quy trình phòng bệnh chung.
Bảng 3.1 Quy trình phòng bệnh chung
3.3.2 Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên 7 con/nghiệm thức gồm 3 nghiệm thức và 3 lần lặp lại.
Nghiệm thức 1: gà được tiêm phòng vaccine đầy đủ theo quy trình phòng bệnh chung và lấy máu định kỳ để theo dõi khả năng đáp ứng miễn dịch.
Nghiệm thức 2: gà được tiêm phòng vaccine đầy đủ theo quy trình phòng bệnh chung nhưng không lấy máu, nhằm so sánh khả năng tăng trọng so với lấy máu định kỳ.
Nghiệm thức đối chứng: gà được tiêm phòng theo quy trình phòng bệnh chung nhưng không tiêm vaccine Gumboro và lấy máu định kỳ để kiểm tra kháng thể thụ động.
Ngày tuổi Tên vaccine Tên công ty Cách tiêm ngừa
3 7 10 15 18 21 30 40 Lasota Gumboro Đậu Cúm A H5N1 Lasota Gumboro Cúm A H5N1 Tụ huyết trùng Navetco Bestar Navetco Navetco Navetco Bestar Navetco Navetco Nhỏ mắt mũi Nhỏ mắt mũi Chủng qua cánh Tiêm dưới da cổ Nhỏ mắt mũi Nhỏ mắt mũi Tiêm dưới da cổ Tiêm dưới da cổ
Bảng 3.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm
Lặp lại (lần)
Số gà trong thí nghiệm
Nghiệm thức I Nghiệm thức II Nghiệm thức đối chứng
1 7 7 7
2 7 7 7
3 7 7 7
3.3.3 Phương pháp lấy mẫu (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Phương pháp lấy máu để kiểm tra kháng thể:
+ Để xác định hàm lượng kháng thể thụ động ở gà con, tiến hành lấy máu ở tim vào lúc 3, 10 ngày tuổi và tĩnh mạch cánh lúc 17, 24 ngày tuổi, mỗi con 0,5ml máu.
+ Để xác định hàm lượng kháng thể sau khi tiêm phòng vaccine. Tiến hành lấy máu ở tĩnh mạch cánh của gà sau khi tiêm vaccin lần 2 được 2 tuần (35 ngày tuổi), 4 tuần (49 ngày tuổi) và sau đó lấy định kỳ mỗi tháng một lần. Số mẫu cần lấy trong mỗi lần là 30% số gà thí nghiệm tương đương 7 mẫu. Mỗi con lấy 0,5- 1ml máu cho vào ống nghiệm, ghi lại ký hiệu của gà thí nghiệm, khi lấy phải sát trùng bằng cồn 700. Đặt ống nằm nghiêng cho máu đông đến khi có huyết thanh đem ly tâm 2000 vòng/phút trong 15 phút, chiết lấy huyết thanh cho vào ống eppendorf bảo quản ở - 200C cho đến khi xét nghiệm.
3.3.4 Phương pháp xét nghiệm
Thực hiện kiểm tra kháng thể kháng virus Gumboro bằng phản ứng ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay).
Nguyên lý
Kỹ thuật ELISA là phản ứng huyết thanh học dựa vào phản ứng miễn dịch học giữa kháng nguyên và kháng thể chuẩn. Kháng nguyên hoặc kháng thể trong mẫu huyết thanh dương tính sẽ được gắn kết với kháng thể hoặc kháng nguyên đã được gắn sẵn trong giếng. Thành phần không gắn kết sẽ bị rửa trôi, phần giữ lại tiếp tục kết hợp với Conjugate (chất kết hợp) có enzyme peroxidase. Phản ứng
chuyển màu (từ không màu thành màu xanh dương) khi có sự tham gia của cơ chất Chromagen. Mức độ màu thể hiện ở mỗi giếng tương ứng với hàm lượng kháng thể ở mỗi mẫu xét nghiệm. Máy đọc ở bước sóng phù hợp sẽ xác định lượng kháng thể hoặc kháng nguyên bị giữ lại trong giếng.
Phương pháp thực hiện
Chuẩn bị mẫu:
Cho 500l dung dịch pha mẫu vào mỗi giếng của đĩa 96 giếng (đĩa sạch). Đĩa này được gọi là đĩa pha loãng huyết thanh. Sau đó thêm 1l huyết thanh cần kiểm tra vào mỗi giếng (pha loãng theo tỷ lệ 1:500). Bắt đầu với giếng A5 và kết thúc bằng giếng H12 (di chuyển trái sang phải) như hình 3.1:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A + + - - 1 2 3 4 5 6 7 8 B 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 C 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 D 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 E 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 F 57 57 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 G 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 H 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92
Hình 3.1 Sơ đồ bố trí huyết thanh xét nghiệm ELISA
Dùng máy lắc trộn đều mẫu huyết thanh và dung dịch pha mẫu sau đó mới chuyển mẫu pha loãng sang đĩa phản ứng có hấp phụ kháng nguyên (virus Gumboro).
Quy trình thực hiện phản ứng
1. Ghi lại vị trí của mẫu bố trí trên đĩa
2. Cho 100 l đối chứng dương tính không pha loãng vào giếng A1 và A2 3. Cho 100 l đối chứng âm tính không pha loãng vào giếng A3 và A4 4. Cho 100 l mẫu đã pha loãng vào đúng vị trí các giếng còn lại. 5. Ủ đĩa trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.
7. Cho 350l nước cất vào mỗi giếng, sau đó loại bỏ các chất lỏng. Lập lại việc rửa 3 - 5 lần.
8. Cho 100l dung dịch Conjugate vào mỗi giếng. 9. Ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.
10. Lặp lại bước 6 và 7 ở trên.
11. Cho 100l dung dịch TMB vào mỗi giếng. 12. Ủ trong 15 phút ở nhiệt độ phòng.
13. Cho 100l dung dịch Stop vào mỗi giếng.
14. Đo và đọc kết quả bằng máy ELISA ở bước sóng 650nm.
Tính toán kết quả
- Trung bình đối chứng dương (PCX) = Giếng 1 + Giếng 2 2
- Trung bình đối chứng âm (NCX) = Giếng 3+ Giếng 4 2
- Tỷ số S/P= OD mẫu - NCX
PCX – NCX
- Hiệu giá kháng thể (X): Log10 X = 1,09 (log10 S/P) + 3,36 X = 10 ^ [1,09 (log10 S/P + 3,36)]
Kết quả (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kết quả IBD ELISA có giá trị khi mật độ quang học trung bình (OD) của đối chứng huyết thanh âm tính là nhỏ hơn 0,150 và trung bình dương tính lớn hơn 0,750. Nếu một trong những giá trị này vượt ra khỏi phạm vi, kết quả xét nghiệm IBD nên được coi là không hợp lý và mẫu phải được kiểm tra lại. Giá trị S/P trong phạm vi nhỏ hơn hoặc bằng 0,2 (hiệu giá kháng thể 396) cho kiểm tra huyết thanh âm tính và lớn hơn 0,2 cho kiểm tra huyết thanh dương tính.
3.4 Các chỉ tiêu theo dõi
+ Tình trạng sức khoẻ của đàn gà sau khi tiêm vaccine
Phương pháp theo dõi tình trạng sức khoẻ của đàn gà sau khi tiêm vaccin: đàn gà sau khi tiêm ngừa vaccin Gumboro sẽ được ghi nhận và theo dõi tình trạng sức khoẻ, như có mệt mõi hay bỏ ăn sau khi tiêm vaccine hay không.
+ Tỷ lệ gà có đáp ứng miễn dịch sau tiêm phòng
+ Tỷ lệ dương tính với kháng thể (%) = Số mẫu dương tính x 100 Số mẫu kiểm tra
+ Theo dõi tốc độ tăng trưởng của gà qua các giai đoạn: giai đoạn nuôi úm (0-28 ngày tuổi), giai đoạn nuôi thịt (28 ngày tuổi-xuất chuồng) theo dõi bằng cách cân trọng lượng gà lúc 1 ngày tuổi, sau đó cân lại lúc kết thúc giai đọan úm và một lần nữa trước khi xuất chuồng lúc gà được 12 tuần tuổi, cân vào lúc sáng sớm trước khi cho gà ăn
Tăng trọng qua các = trọng lượng cuối - trọng lượng đầu giai đoạn (g/con) giai đoạn (g/con) giai đoạn (g/con)
+ Mức tiêu tốn thức ăn qua các giai đoạn
Cân lượng thức ăn đầu kỳ trước khi cho gà thí nghiệm ăn, sau đó cộng toàn bộ lượng thức ăn đã cho ăn trừ đi lượng thức ăn thừa lúc cuối kỳ.
HSCHTĂ = Tổng lượng thức ăn qua các giai đoạn Tăng trọng qua các giai đoạn
3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu
Tất cả các số liệu thô được xử lý bằng phần mềm Excel. So sánh tăng trọng giữa các nghiệm thức bằng phép thử t của phần mềm minitab 16.0.
Chƣơng 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 Tình trạng sức khoẻ của đàn gà sau khi tiêm vaccine
Qua ghi nhận được trong quá trình thí nghiệm, sau khi tiêm vaccine có 2 gà thí nghiệm có biểu hiện mệt mỏi, ăn ít hơn những con khác. Tuy nhiên trạng thái này trở lại bình thường ở ngày hôm sau, sau khi gà được nghỉ ngơi. Những biểu hiện ở trên có thể là do gà còn nhỏ, khi tiêm vaccine cầm bắt gà nên có biểu hiện mệt mỏi. Điều này chứng tỏ rằng vacine Bal-IBD B38 an toàn khi sử dụng không gây gây sốc cho đàn gà.
4.2 Kết quả kiểm tra kháng thể thụ động mẹ truyền trên gà tàu thí nghiệm
Bảng 4.1 Kết quả kiểm tra kháng thể thụ động mẹ truyền trên gà tàu thí nghiệm
Ngày tuổi Số mẫu kiểm tra Số mẫu dƣơng tính Tỷ lệ (%) Tỷ số S/P (X±SE) Hiệu giá kháng thể (X±SE) 3 5 5 100 0,81±0,30 1877±758 10 5 5 100 0,44±0,05 930±108 17 5 3 60 0,20±0,02 394±31 24 5 0 0 0,12±0,02 236±38
X: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn
Kết quả bảng 4.1 cho thấy, kháng thể thụ động mẹ truyền ở gà con duy trì đến 10 ngày tuổi với tỷ lệ dương tính là 100% và kháng thể này đủ mức bảo hộ cho gà con đến 10 ngày. Tuy nhiên đến 17 ngày tuổi chỉ còn 60% gà tồn tại kháng thể thụ động, trung bình đều dưới ngưỡng bảo hộ, hiệu giá kháng thể giảm đáng kể dưới mức bảo hộ 394 so với 396. Theo nghiên cứu của (Lê Văn Hùng, 1996), nghiên cứu miễn dịch thu được trên các bệnh truyền nhiễm do virus (Newcastle, Gumboro) cho thấy khi gây miễn dịch cho gà mẹ nhiều lần bằng vaccine sống và sau đó bằng vaccine vô hoạt thì trong máu gà mẹ có hàm lượng kháng thể cao và kháng thể mẹ truyền cho gà con, bảo vệ đàn gà con được 4-5 tuần tuổi. Nếu gà mẹ chỉ chủng ngừa bằng vaccine nhược độc thì kháng thể truyền chỉ bảo vệ cho gà con 1-3 tuần. Nhưng kết quả nghiên cứu trên kháng thể chỉ bảo hộ được cho gà con đến 10 ngày tuổi, điều này có thể là do gà mẹ có hàm lượng kháng thể thấp hoặc đàn gà mẹ chủng ngừa không đầy đủ. Song các nghiên
cứu gần đây cho thấy kháng thể truyền từ gà mẹ truyền sang gà con không ổn định, lúc cao, lúc thấp, không đồng đều giữa các con trong đàn. Qua đó cho thấy việc tiêm phòng cho gà bằng vaccine đang gặp trở ngại lớn nhất là kháng thể thụ động mẹ truyền, nên quy trình tiêm phòng bằng vaccine cho gà con không có lịch rõ ràng và cũng không có lịch áp dụng chung cho tất cả mọi nơi (Nguyễn Xuân Bình và ctv, 2000).
4.3 Khả năng bảo hộ của vaccin Gumboro đối với giống gà tàu vàng
Bảng 4.2 Tỷ lệ đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine lần hai 14 ngày (lúc gà 35 ngày tuổi) Nghiệm thức Số mẫu kiểm tra Số mẫu dƣơng tính Tỷ lệ (%) Tỷ số S/P (X±SE) Hiệu giá kháng thể (X±SE) NT1 7 7 100 0,38±0,09 804±194 Đối chứng 7 0 0 0,03±0,02 46±29
NT1: sử dụng vaccine, X: giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn
Qua kết quả bảng 4.2 cho thấy gà có tiêm phòng vaccine đều có đáp ứng miễn dịch 100% sau khi tiêm lần 2 được 14 ngày. Qua đó cho thấy vaccine đảm bảo đúng khuyến cáo của nhà sản xuất. Điều này phù hợp với nhận định của Lê Văn Năm (2004) tiêm vaccine sau 2-3 tuần cơ thể mới tạo miễn dịch, vì bình thường lúc đầu khi kháng nguyên mới vào cơ thể đã kích thích hệ thống miễn dịch nhưng cơ thể không thể sản sinh ra ngay kháng thể mà phải trải qua một thời