2.2.2.I. Thu thập bệnh nhân vào nghiên cứu
Bệnh nhân vào điều trị tại Khoa nội 1 - Bệnh viện lao và bệnh phổi Hà Nội được chọn lọc theo tiêu chuẩn đã định ở mục 2.1.2. Những thông tin của bệnh nhân được ghi vào phiếu theo dõi bệnh nhân trong phụ lục.
2.2.2.2. Các thông số theo dõi
a) Các triệu chứng về lâm sàng trước và sau 2 tháng điều tiị: ho khan, ho ra đòfm, ho ra máu, sốt, có hay không có ran ở phổi, khó thở đau ngực.
b) Xét nghiệm vi sinh trước và sau 2 tháng điều trị thu được kết quả cùng với với tiền sử sử dụng thuốc chống lao để phân loại bệnh nhân theo thể lao gồm: lao mới - là những bệnh nhân nhân chưa bao giờ dùng thuốc hoặc mới dùng thuốc lao dưới một tháng; lao thất bại - những bệnh nhân còn vi trùng lao trong đờm từ tháng điều trị thứ 5 trở đi; lao tái phát được chia làm 2 loại: bệnh nhân đã hoàn thành điều trị nay mắc trở lại, bệnh nhân không dùng thuốc lao trên 2 tháng trong quá trình điều trị, sau đó quay trở lại điều trị với AFB(+) trong đờm [1].
2.2.23. Phương pháp lấy mẫu huyết tương và định lượng rìỷampỉcỉn
a) Phưcỉng pháp lấy mẫu huyết tương
Ngày lấy mẫu: Bệnh nhân uống thuốc chống lao vào ngày thứ 15, uống vào lúc 9 giờ sáng (phải nhịn ăn sáng) và lấy máu vào 11 giờ và 12 giờ trưa (tưofng ứng thời điểm 2 giờ và 3 giờ sau khi uống). Quy trình lấy mẫu như sau:
- Lấy máu (2,5 ml) vào ống nghiệm đã được tráng heparin chống đông, xoay nhẹ ống theo chiều ngang để trộn đều máu với heparin.
- Ly tâm mẫu máu đã chống đông với tốc độ 3500 vòng/phút trong thời gian 10 phút.
- Tách phần huyết tương sau khi li tâm.
Mẫu huyết tương được bảo quản trong tủ lạnh sâu - 40° c cho đến khi phân tích.
b) Phương pháp định lượng riíampicin huyết tưofng * Qiiết rifampicin huyết tương
Ngày định lượng: lấy mẫu huyết tương trong tủ lạnh sâu, làm tan đông bằng nước, rồi tiến hành chiết rifampicin như sau:
1,5 ml acetonitril
Hình 2.1: Sơ đồ tóm tắt phương pháp chiết rifampicin từ huyết tương
Lấy chính xác 1 ml huyết tương có chứa rifampicin, thêm 1,5 ml acetonitril, lắc bằng máy lắc với tốc độ 1000 vòng trong 1 phút. Tiếp tục li tâm trong 25 phút, tốc độ 4000 vòng/phút. Dịch li tâm được lọc qua giấy lọc có kích thước lỗ 0,45 |Lim và được tiêm vào cột sắc ký. Dịch lọc này được phân tích bằng máy sắc ký với điều kiện sắc ký như sau:
* Điều kiện sắc ký
- Pha tmh: Cột Alltech Appolo C18 (250 mm X 4,6mm, kích ứiước hạt 5 |Lưn)
- Bảo vệ cột: Alltech Appolo
- Dung dịch đệm: Dung dịch kali hydrophosphat 0,05M, điều chỉnh pH về 4,5 bằng dung dịch acid phosphoric 1%
- Pha động: Methanol: dung dịch đệm = 65:35 - Bước sóng định lượng: 254 nm
- Thể tích tiêm: 30 )Lil