b. Nhận xét về nội dung của LVTN ( Đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):
5.3 Sắc ký cột cao Chloroform
Cao C được điều chế từ quá trình chiết lỏng – lỏng cao tổng methanol với dung môi chloroform, khối luợng cao thu được là 21,65 g. Tiến hành sắc ký cột cao choloroform theo dõi đồng thời bằng sắc ký lớp mỏng, để gom các lọ có vết giống nhau thành từng phân đoạn.
Chiết lỏng – lỏng với chloroform. Lấy lớp dưới, cô quay thu hồi DM.
Lớp trên
Cao ethyl acetate 13 g
Lớp dưới Rửa sạch, loại bỏ lá sâu bệnh, héo úa. Phơi khô tự nhiên xay nhuyễn bột lá. Cho lá vào túi vải, buộc kín miệng cho vào lọ thủy tinh 5l ngâm với methanol, thu dịch chiết đem cô quay thu hồi dung môi.
Chiết lỏng – lỏng với ethyl acetate. Lấy lớp trên, cô quay thu hồi DM. Cao chloroform 21,65 g Cao tổng methanol 98 g Lá Băng lăng 1,7 kg (bột lá)
Chương 5: Thực nghiệm
SVTH: Lê Thành Việt Tân 31
Kích thước cột: chiều dài: 85 cm, đường kính: 5 cm
Nạp chất hấp phụ là silica gel Merck, khối luợng silica gel được nạp vào cột là 150 g.
Silica gel truớc khi nhồi cột được sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ khoảng 110o
C trong 15 phút, lấy ra để nguội, cho trương nở trong petroleum ether 60 – 90 khoảng 30 phút và nạp vào cột theo phương pháp nạp cột uớt.
Cao C truớc khi nạp vào cột được chấm lên lớp mỏng và giải ly với nhiều hệ dung môi khác nhau. Sau đó, cao được tiền hấp phụ với khoảng 10 g silica gel. Dung môi giả ly cột sắc ký cao C đầu tiên được lựa chọn bằng kết quả trên lớp mỏng là PE : EA với tỉ lệ 8:2.
Cột sau khi nạp mẫu hứng mỗi lọ 100 ml, dung môi trong lọ được cô quay thu hồi, chất được hút ra lọ bi riêng. Dùng sắc ký lớp mỏng theo dõi, những lọ nào có vết giống nhau thì gom chung với nhau thành một phân đoạn.
Thuốc hiện hình sử dụng là H2SO4 đậm đặc trong methanol (với tỉ lệ 2:8). Lớp mỏng sau khi nhúng thuốc hiện hình được gia nhiệt trên bếp điện.
Các hệ dung môi đã sử dụng để giải ly cột là: PE : EA (8:2), PE : EA (1:1), EA 100 %.
Chương 5: Thực nghiệm
SVTH: Lê Thành Việt Tân 32
Bảng 5.1: Kết quả sắc ký cột cao C PĐ STT lọ SKC SKLM Kết quả SKLM Dạng chất KL (g) BL.C01 P01–P02 PE : EA 8:2 PE : EA
1:1 Nhiều vết Màu đen 0,9
BL.C02 P03–P17 " " Nhiều vết Màu xanh 1,3
BL.C03 P18–P20 " " Nhiều vết Màu xanh 0,6
BL.C04 T01– T07 PE : EA 1:1
PE : EA 3:2
Nhiều vết Xanh nhạt 0,4
BL.C05 T08 – T10 " " Nhiều vết Màu xanh 5,8
BL.C06 T11 – T35 " PE : EA 3:2 Nhiều vết, có 3 vết chính:tím, xanh, xám Trắng xanh 4 BL.C07 T37 – T42 " EA 100% Nhiều vết Vàng nhạt 1,2 BL.C08 E01 – E02 100% EA C : ME 9:1 Nhiều vết Vàng nhạt 0,1 BL.C09 E03 – E41 " " Nhiều vết Vàng nâu 0,8 BL.C10 E42 – E58 " " Nhiều vết Vàng nâu 0,5
Tổng cộng khối luợng của các phân đoạn là: 15,6 g Thu suất quá trình sắc ký cột cao C:
Chương 5: Thực nghiệm
SVTH: Lê Thành Việt Tân 33
Nhận xét: sắc ký cột cao chloroform thu đuợc tổng cộng 10 phân đoạn, các phân đoạn có vết đặc trưng và rõ ràng được chúng tôi chọn khảo sát tiếp. Các phân đoạn còn lại do vấn đề về thời gian nên tạm thời chưa khảo sát. Qua quá trình sắc ký cột cao chloroform chúng tôi chọn phân đoạn BL.C06 để xử lý tiếp.