ðây là phương pháp dựa trên cơ sở phát triển của vi khuẩn bị ức chếở nhiệt ñộ
lạnh sâụ Với phương pháp này, tế bào có thể bị vỡ trong quá trình làm lạnh và làm tan mẫụ Một nguyên nhân dẫn ñến việc làm vỡ tế bào là việc tích lũy các chất ñiện giải trong mẫu bảo quản và hình thành các tinh thể nước trong tế bàọ ðể khắc phục nhược
ñiểm này, người ta ñã bổ sung các chất làm hạn chế tốc ñộ lạnh sâu và làm tan nhanh như glycerol, DMSO (dimethyl sulfoxide). Việc bảo quản theo phương pháp lạnh sâu này ñược thể hiện ở các thang nhiệt ñộ khác nhau như -200C, -300C, -400C, -700C, - 1400C và -1900C. Nói chung, ở mức nhiệt ñộ cao hơn -300C cho hiệu quả thấp do tế
bào chịu nồng ñộ muối cao sinh ra từ các chất ñiện giảị Phương pháp bảo quản này có hiệu quả với nhiều nhóm vi sinh vật khác nhau như nấm sợi, nấm men, vi khuẩn, xạ
khuẩn và vi rút. ðặc biệt với phương pháp bảo quản lạnh sâu trong môi trường nitơ
lỏng là phương pháp tốt hơn cả. Tuy nhiên phương pháp này cũng bộc lộ một số
15
nổ, … ðặc biệt phương pháp này không thích hợp với các chủng vi sinh vật thường xuyên dùng ñến. Nói chung, phương pháp lạnh sâu thường ñược dùng với các chủng vi sinh vật có những ñặc tính quí mà không thích hợp với việc ñông khô.