2.3.3.1. Phương pháp phân tích các tác nhân sinh học * Phương pháp kiểm tra nhanh
- Làm các tiêu bản giọt ép: Áp dụng theo Nguyễn Lân Dũng và cộng sự [3].
- Làm các tiêu bản phếch: Từ mô gan tụy tôm bệnh và tôm khỏe, phếch lên lam kính sạch và tiến hành nhuộm với các loại thuốc nhuộm khác nhau: Gram; Hematoxylin và Eosin; Pinkerton; Giemsa ñể phát hiện sự hiện diện của vi khuẩn ký sinh nội bào hay các vi khuẩn ký sinh trong nguyên sinh chất của gan tụy tôm.
* Phương pháp xác ñịnh LD50
Áp dụng phương pháp Reed và Muench (1938)
Bố trí thí nghiệm cảm nhiễm vi khuẩn lên Postlarva tôm khỏe với các nghiệm thức: Nghiệm thức ñối chứng, nghiệm thức thí nghiệm ñược cảm nhiễm với các nồng
ñộ vi khuẩn: 5x101, 5x102, 5x103, 5x104, 5x105cfu/ml. Nồng ñộ gây chết 50% tôm Postlarva của vi khuẩn ñược xác ñịnh sau 24h cảm nhiễm và ñược tính theo công thức:
LogLD50 = LogA + x Log10 Trong ñó:
LogA: Nồng ñộ vi khuẩn gây tỷ lệ chết Postlarvae dưới và cận 50%
d%: Tỷ lệ chết Postlarvae dưới 50% cao nhất
t%: Tỷ lệ chết Postlarvae trên 50% thấp nhất
Log10: ñộ pha loãng
* Phương pháp nghiên cứu mầm bệnh vi khuẩn nuôi cấy ñược
Dựa trên phương pháp nghiên cứu bệnh vi khuẩn của Frerich (1984) và Kimberley (2004), thực hiện phân lập các chủng vi khuẩn hiện diện trong các mô gan tụy của tôm bệnh. Quy trình phân lập vi khuẩn ñược thực hiện theo hình 2.5
- Vi khuẩn hiếu khí tổng số và vibrio tổng số trong mẫu nước: Theo phương pháp gián tiếp của Koch
Hình 2.4: Phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn
2.3.3.2. Phương pháp phân tích các chỉ tiêu chất lượng nước
- Nhiệt ñộ nước (T0C): ðo bằng nhiệt kế thủy ngân (00C-1000C). - ðộ pH: ðo bằng pH meter cầm tay.
- ðộ muối (S0/00): Xác ñịnh bằng khúc xạ kế (refractometor) - DO: ðo bằng phương pháp winkler
- BOD: Phương pháp tính gia số oxy sau 5 ngày ủ mẫu.