3.1. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
3.1.1. Đối tượng nghiên cứu
- Một số bệnh nấm hại cói vụ chiêm năm 2014 tại Nga Tân, Nga Sơn, Thanh Hóa.
3.1.2. Vật liệu nghiên cứu
3.1.2.1. Mẫu bệnh
- Các mẫu cói bị bệnh thu thập ngoài đồng ruộng vụ chiêm năm 2014 tại Nga Tân, Nga Sơn, Thanh Hóa.
- Tập đoàn 72 mẫu cói tại nhà lưới của bộ môn Bệnh cây.
3.1.2.2. Dụng cụ nghiên cứu
- Que cấy, bình tam giác, đũa thủy tinh, panh, ống đong, dao cắt mẫu, đèn cồn, cốc thủy tinh….
- Tủ lạnh, tủđịnh ôn, buồng cấy, kính hiển vi, bình bơm…
3.1.2.3. Thuốc trừ bệnh
- Các thuốc trừ bệnh: Aliette 800WG, Ridomil MZ 70WP, Vicarben 50SC.
3.1.2.4. Môi trường nghiên cứu
- Môi trường nuôi cấy nấm WA, PSM, PSA, cám Agar, môi trường đậu, cà rốt agar, bột ngô agar.
* Môi trường WA
Thành phần:
Cách làm: Cho 1000ml nước cất vào xoong, hoà 20g agar vào 1000ml nước, dùng đũa quấy cho agar tan đều, cho lên bếp đun, vừa đun vừa quấy đều tay. Sau khi sôi 5 phút, đổ môi trường vào lọ Scott, vặn nắp vừa phải (không được văn chặt quá), cho vào nồi hấp, hấp khử trùng 15 phút. Hấp xong, lấy lọ môi trường ra khỏi nồi hấp, để nguội khoảng 60 - 70°C đổ môi trường vào các đĩa petri, khi môi trường nguội, quấn băng chống nhện xung quanh miệng đĩa, cho các đĩa này vào túi
Agar: 20 gam Nước cất: 1000 ml
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 27 nilon trắng sạch buộc chặt lại bằng dây chun, để vào khay nhựa, cất vào tủ.
* Môi trường PSM
Thành phần:
Cách làm:
Cà rốt rửa sạch, cắt nhỏ cho vào nước cất đun 10 phút, nghiền nhuyễn. Khoai tây rửa sạch, cắt nhỏ cho vào nước cất đun nhừ, nghiền nhuyễn.
Lấy 20ml dịch cà rốt trộn với 20ml dịch khoai tây và 20g agar, thêm nước cất cho đủ 1 lít, hấp khử trùng ở 121°C, 1.5 atm trong 30 phút.
Chú ý: Môi trường PSM, sau khi hấp khử trùng để môi trường nguội khoảng
55 - 60oC cho thêm dung dịch hóa chất sau vào:
- Piramicin 10ppm: (tạo dung dịch mẹ: hòa 0,4 ml Piramicin vào 6,7ml nước cất vô trùng) sau đó lấy lượng dung dịch mẹ cho vào môi trường sao cho đủ 10ppm.
- Rifampicin 50ppm: (tạo dung dịch mẹ: hòa 0,05g Rifampicin trong 6,7ml methanol) sau đó lấy lượng dung dịch mẹ cho vào môi trường sao cho đủ 50ppm.
- Hymexazol 50ppm: (tạo dung dịch mẹ: hòa 0,05g Hymexazol trong 6,7ml nước cất vô trùng) sau đó lấy lượng dung dịch mẹ cho vào môi trường sao cho đủ 50ppm.
*Môi trường PSA
Thành phần:
Khoai tây: 200 gam Saccarose: 20 gam Agar: 20 gam Nước cất: 1000 ml
Cách làm: Khoai tây gọt sạch vỏ, cắt lát mỏng luộc nhừ với 1000ml nước sau đó lọc qua vải màn lấy nước trong cho agar và đường vào. Cho vào xoong nấu cho tan agar và đường, vừa đun vừa quấy đều tay, cho vào lọ Scott hấp khử trùng ở
Khoai tây: 20 gam Cà rốt: 20 gam Agar: 20 gam Nước cất: 1000 ml
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 28 1210C trong 15 phút. Hấp xong để nguội khoảng 55 - 60oC cho môi trường vào đĩa petri đậy nắp lại, khi môi trường nguội, quấn băng chống nhện xung quanh miệng đĩa, cho các đĩa này vào túi nilon trắng sạch buộc lạị bằng dây chun, để vào khay nhựa, cất vào tủ.
*Môi trường đậu Hà Lan - Agar
Thành phần:
Đậu Hà Lan: 125 gam Saccarose: 15 gam Agar: 20 gam Nước cất: 1200 ml
Cách làm: Cho 125g đậu Hà Lan vào 1200ml nước cất. Đun sôi trong 45 phút, lọc bằng vải màn 4 lớp. Cho vào bình mức 1 lít. Hòa 15g agar vào đun sôi rồi cho vào lọ Scott đem hấp ở 1210C trong 30 phút. Hấp xong để nguội khoảng 55 - 60oC, sau đó đổ ra đĩa petri để nguội, quấn băng chống nhện xung quanh miệng đĩa, cho các đĩa này vào túi nilon trắng sạch buộc lại bằng dây chun, để vào khay nhựa, cất vào tủ.
* Môi trường Cám - Agar:
Thành phần:
Cám: 50 gam Đường: 20 gam Agar: 20 gam Nước cất: 1000 ml
Cách làm: Cho 50 gam cám vào 1000ml nước. Đun sôi trong 5 phút, lọc dung dịch bằng vải màn 4 lớp. Cho thêm nước cho đủ 1000ml. Thêm 20 gam đường, 20 gam agar quấy đều rồi cho xoong lên bếp đun nhỏ lửa, vừa đun vừa quấy đều tay, sôi 2 phút là được, đổ môi trường vào lọ Scott, đậy nắp lọ, hấp khử trùng ở 1210C trong 15 phút. Hấp xong để nguội khoảng 55 - 60oC đổ môi trường vào đĩa petri đậy nắp lại, khi môi trường nguội, quấn băng chống nhện xung quanh miệng đĩa, cho các đĩa này vào túi nilon trắng sạch buộc lại bằng dây chun, để vào khay nhựa, cất vào tủ.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 29
* Môi trường Bột ngô - Agar:
Thành phần:
Bột ngô: 30 gam Agar: 20 gam Nước cất: 1000 ml
Cách làm: cho bột ngô và 1000ml nước cất vào nồi, đun sôi trong 45 phút, lọc bằng vải màn, cho thêm nước cất cho đủ 1000ml, hòa tan agar rồi đun cho agar tan đều. Hấp khử trùng ở 121°C, 1.5 atm trong 30 phút, sau đó để nguội môi trường đến 60 - 70°C rồi đem đổ ra các đĩa petri đã được khử trùng và sử dụng để cấy nấm.
3.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
3.2.1. Địa điểm nghiên cứu