được thực hiện theo phương pháp được trình bày ở mục 3.2.3. Ở thí nghiệm này, dung môi trích ly sử dụng là nước cất với các tỷ lệ thay đổi theo các nghiệm thức khảo sát (từ 1: 1 đến 1: 6, w/v), tiến hành trích ly ở nhiệt độ phòng (30 ± 2 C) trong thời gian 20 phút (hình 3.2). Sau quá trình trích ly, dịch enzyme thô sau khi ly tâm được xác định thể tích và đo hoạt tính theo phương pháp Anson cải tiến.
Chỉ tiêu theo dõi: Khối lượng và độ ẩm nguyên liệu, thể tích dịch chiết enzyme tương ứng và hoạt tính của protease có trong mẫu khảo sát (U/g CKTĐT).
Kết quả thu nhận: Tỷ lệ mẫu thịt đầu tôm và dung môi sử dụng phù hợp giúp hiệu quả thu nhận protease đạt cao nhất.
3.3.4 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của pH môi trường đến hiệu quả trích ly protease trích ly protease
Mục đích: Xác định được khoảng pH thích hợp (điều chỉnh bằng dung dịch đệm khác nhau) giúp thu được protease từ mẫu thịt đầu tôm nguyên liệu có hoạt tính cao nhất.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí ngẫu nhiên với 1 nhân tố Xác định hoạt tính protease
Thịt đầu tôm sú
Trữ đông
A 1
Nghiền
Tỷ lệ mẫu:dung môi khác nhau
Ủ hỗn hợp ở nhiệt độ phòng, 20 phút
A 2 A 3 A 4 A 5 A 6
Dịch chiết Lọc, ly tâm
Nhân tố B: Sự thay đổi pH của dung môi trích ly, thay đổi ở 6 mức độ
B1: pH = 7 B2: pH = 8 B3: pH = 9
B4: pH = 10 B5: pH = 11 B0: Đối chứng (nước cất 2 lần). Số nghiệm thức khảo sát: 5 + 1 mẫu đối chứng (trích ly bằng nước cất).
Số mẫu thí nghiệm: 6 x 3 = 18 mẫu.
Khối lượng mẫu sử dụng: 18 x 0,2 kg/mẫu = 3,6 kg.
Tiến hành thí nghiệm: Quá trình trích ly protease từ thịt đầu tôm được thực hiện tương tự như thí nghiệm 1. Thay thế nước cất bằng các dung dịch đệm có giá trị pH khác nhau, bao gồm dung dịch đệm phosphate (pH 7, 8), đệm Glycine - NaOH (pH 9 ÷ 11). Tỷ lệ mẫu và dung môi được sử dụng dựa trên kết quả của thí nghiệm 1. Điều kiện ủ và phương pháp tách chiết giữ cố định(Hình 3.3)
Hình 3.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 2
Chỉ tiêu theo dõi: Hoạt tính của protease (U/g CKTĐT) tương ứng với các nghiệm thức khảo sát.
Kết quả thu nhận: Loại dung dịch đệm và pH thích hợp được sử dụng làm dung môi trích ly protease có hoạt tính cao nhất.
Thịt đầu tôm sú Trữ đông
B 1
Nghiền
pH của dung môi trích ly
Ủ hỗn hợp ở nhiệt độ phòng, 20 phút
B 2 B 3 B 4 B 5 B 0
Dịch chiết Lọc, ly tâm Tỷ lệ mẫu : dung môi
(Thí nghiệm 2)