Nhiều nghiên cứu trên thế giới cũng quan tâm đến việc trích ly protease từ phụ phẩm thủy sản đã được thực hiện từ rất sớm. Corvisat (1857) đã chứng tỏ khả năng chiết tách trypsine từ dịch tụy, đây là protease đầu tiên được thu nhận nhưng chưa
hấp phụ. Nghiên cứu này có ý nghĩa quan trọng trong chiết tách và nghiên cứu các tính chất của enzyme cũng như protein. Tiếp theo đó là Hommarsten (1872) chiết tách được Chymosine (trích dẫn từ Nguyễn Lệ Hà, 2011).
Gần đây, Min-Soo Heu et al. (2002) đã nghiên cứu trích ly, kết tủa phân đoạn hoạt tính protease từ phụ phẩm tôm. Quá trình trích ly protease được nghiên cứu riêng lẻ cho từng thành phần các phụ phẩm (đầu, thân, đuôi) được loại bỏ trong quá trình chế biến. Phụ phẩm sau khi xử lý và được trích ly bằng nước cất, ly tâm thu được dịch trích thô, dịch trích thô kết tủa phân đoạn bởi ammonium sulfate. Kết tủa ở 2 nồng độ 30 ÷ 50% (chất chỉ thị NPS-I và SS-I), và 50 ÷ 70% (chất chỉ thị NPS-II và SS-II), sau đó ly tâm thu được kết quả tương ứng. Hoạt động Endoprotease của dịch trích thô là 0,2 U/mg đối với Hemoglobin (Hb, pH 3,0), 0,16 U/mg đối với azocasein (Ac, pH 6,0) và 0,12 U/mg đối với benzoyl-Arg-β-Naphthylamide (BANA, pH 7,0). Hoạt động của exoprotease là 0,11 ÷ 0,17 U/mg đối với Arg-β- Naphthylamide (ArgNA, pH 7,0), 0,06-0,11 U/mg đối với Lys-β- Naphthylamide (LysNA, pH 7,0) và 0,08 ÷ 0,09 U/mg đối với Leu-β- Naphthylamide (LeuNa, pH 7,0). Hoạt động của endoprotase tăng từ 5 ÷ 7,4 lần đối với NPS-I và SS-I, và 1,9 ÷ 2,7 lần đối với NPS-II và SS-II. Trong khi đó, exoprotease tăng từ 3,6 ÷ 4,8 lần đối với NPS-I và SS-I, và 5,6 ÷ 7,2 lần đối với NPS-II và SS-II.
Từ các nghiên cứu thực tế trong và ngoài nước ở lĩnh vực trích ly và ứng dụng protease từ nguồn động vật, một số vấn đề cơ bản cần quan tâm là:
- Sự ổn định của nguồn nguyên liệu cung cấp protease.
- Các điều kiện trích ly enzyme phụ thuộc rất lớn vào đặc điểm từng loại enzyme và nguồn nguyên liệu, trong đó tỷ lệ dung môi sử dụng để hòa tan enzyme, tác động của pH, nhiệt độ và thời gian trích là các yếu tố có tầm quan trọng cao nhất.
- Việc xác định các tính chất cơ bản của enzyme là cơ sở bước đầu trong việc dự đoán đặc điểm, phương thức hoạt hóa và lĩnh vực ứng dụng của protease khảo sát.
CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU