Ẹcoli là trực khuẩn hiếu khắ hoặc yếm khắ tuỳ tiện, có thể phát triển ở nhiệt ựộ từ 5 Ờ 400C, nhiệt ựộ thắch hợp là 370C, pH thắch hợp là 7,2 - 7,4, nhưng có thể phát triển ựược ở pH từ 5,5 - 8 (Nguyễn Như Thanh và cs, 1997).
Vi khuẩn Ẹcoli phát triển dễ dàng trên các môi trường nuôi cấy thông thường, một số chủng có thể phát triển ựược ở môi trường tổng hợp ựơn giản.
- Trên môi trường thạch thường: nuôi cấy trực khuẩn Ẹcoli ở 370C trong 24 giờ, hình thành khuẩn lạc tròn ướt, bóng láng, không trong suốt, màu tro nhạt, hơi lồi, ựường kắnh 2 - 3 mm. Nuôi lâu, khuẩn lạc chuyển màu gần như nâu nhạt và mọc rộng ra, có thể quan sát thấy cả những khuẩn lạc dạng nhày (M - Mucous) và dạng nhám (R - Rough).
- Trong môi trường nước thịt: sau khi nuôi cấy 370C trong 24 giờ trực khuẩn Ẹcoli phát triển rất nhanh, môi trường rất ựục, có cặn màu tro trắng nhạt lắng xuống ựáy, ựôi khi hình thành màng mỏng xám nhạt trên bề mặt môi trường, môi trường có mùi phân thốị
- Trên môi trường thạch peptone: sau 18 - 24 giờ bồi dưỡng trong tủ ấm vi khuẩn mọc thành những khuẩn lạc tròn ướt, màu xám, kắch thước trung bình, mặt khuẩn lạc hơi lồi lên, có nếp nhăn và bề mặt láng bóng.
- Trên môi trường thạch máu: sau 24 giờ nuôi cấy ở 370C hình thành khuẩn lạc to, ướt, lồi, viền không gọn, màu sáng, kắch thước từ 1 - 2 mm, có khi gây dung huyết.
- Trên môi trường thạch MacConkey: sau khi nuôi cấy 24 giờ, bồi dưỡng tủ ấm 370C hình thành khuẩn lạc màu ựỏ cánh sen, tròn nhỏ, hơi lồi, không nhày, rìa gọn, không làm chuyển màu môi trường.
- Trên môi trường Endo: vi khuẩn hình thành khuẩn lạc màu ựỏ mận chắn, có ánh kim hoặc không .
- Trên môi trường EMB (Eosin Methyl Blue): hình thành khuẩn lạc màu tắm ựen có ánh kim.
- Trên môi trường thạch SS (Salmonella Shigella): vi khuẩn Ẹcoli hình thành khuẩn lạc màu ựỏ.
- Trên môi trường thạch Brilliant green: sau 24 giờ nuôi cấy ở 370C hình thành khuẩn lạc màu vàng chanh.
Không mọc trên các môi trườngMalasit và Mulerkauffmann. Bị kiềm chế khi nuôi trong các môi trường Wilson Blair.