4. đối tượng và phạm vi nghiên cứu của ựề tài
2.3.1. Phương pháp ựiều tra, thu thập, phân lập các nguồn NPV kắ sinh trên
trên sâu non bộ cánh vảy hại rau vùng Hà Nội và phụ cận
điều tra diễn biến bệnh NPV trên các loại sâu hại rau bộ cánh vảy phổ biến vùng Hà Nội và phụ cận. Mỗi loại rau ựiều tra 3 ruộng, mỗi ruộng ựiều tra 5 ựiểm chéo góc, mỗi ựiểm 1m2. điều tra 7 ngày 1 lần từ khi trồng ựến thu hoạch.
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ sâu bệnh và mật ựộ sâu kắ chủ trên ruộng qua các ngày ựiều tra.
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 25
Số sâu bệnh
Tỷ lệ sâu bệnh (%) = X 100
Tổng số sâu ựiều tra ựược
Tổng số sâu ựiều tra ựược
Mật ựộ sâu hại (con/m2) = X 100
Tổng diện tắch ựiều tra
Dựa trên những triệu chứng sâu chết bệnh do virus ựể thu thập, nhận xét. Mẫu bệnh thu riêng trong từng lọ thủy tinh nhỏ có nắp kắn, sau ựó loại bỏ sâu chết vì bệnh khác, ựem về phòng thắ nghiệm phân lập và tinh chiết.
- Tinh chiết virus theo phương pháp của Smith (1967). Phương pháp này ựược Hoàng Thị Việt (1996) áp dụng, cụ thể như sau:
+ Cho sâu bệnh vào nước cất (1 mẫu sâu/1ml nước) + để mẫu thối rữa trong vài ngày
+ Nghiền bằng cối sứ nhỏ rồi lọc qua vải mỏng ựể loại bỏ cặn bã
+ Li tâm dịch với tốc ựộ 500 vòng/phút trong 5 phút. Loại bỏ cặn phần dưới ống, lấy phần dịch phắa trên. Li tâm tiếp với tốc ựộ 2500 vòng/phút trong 15 phút, lấy phần nước dưới hòa với nước cất rồi li tâm tiếp với tốc ựộ 10.000 vòng/phút từ 2- 3 lần ựể lấy phần lắng màu trắng. đó là các thể vùi của NPV.
- để xác ựịnh hình dạng thể vùi, mẫu ựược cố ựịnh trên lưới ựồng có màng bán thấm Collodion, soi qua kắnh hiển vi ựiện tử và chụp ảnh.