chồi từ callus
Trong nuôi cấy mô tế bào thực vật ựường thường ựược bổ sung vào môi trường nuôi cấy ựể cung cấp dưỡng chất cho mô và cây sinh trưởng và phát triển vì trong quá trình nuôi cấy mô và cây không có quá trình quang hợp hoặc quang
Ghi chú: đ/C: MS
CT1: MS + 0,5 mg/l picloram CT2: MS + 0,75 mg/l picloram
CT3: MS + 1 mg/l picloram CT4: MS + 1,5 mg/l picloram
Hình 4.3. Ảnh hưởng của picloram ựến sự phát sinh callus
CT2 CT3 CT4
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 28 hợp xảy ra rất ắt (Nguyễn Quang Thạch và cộng sự, 2009). Vì vậy việc bổ sung ựường vào môi trường nuôi cấy là rất quan trọng trong quá trình nuôi cấy mô.
Theo nghiên cứu của Ruby Thapa và cộng sự, 2007 trên lúa các loại ựường sucrose, glucose, maltose và nồng ựộ ựường khác nhau có ảnh hưởng khác nhau ựến khả năng tạo chồi của mẫu cấy. Bổ sung ựường glucose vào môi trường nuôi cấy cho kết quả tái sinh cây và phát sinh rễ tốt hơn so với ựường sucrose và maltose. Chiều cao chồi và chiều dài rễ ựạt cao nhất ở nồng ựộ ựường là 0,25%.
Nghiên cứu trên ngô của DP Gauchan, 2012 cho thấy khi bổ sung ựường maltose và sucrose ở nồng ựộ thấp (0,25 Ờ 2,5%) cho kết quả phát sinh chồi và tạo rễ của mẫu là cao nhất.
Theo Nguyễn Thị Thanh Phương và cộng sự (2010), nuôi cấy callus tỏi trên môi trường MS bổ sung 3 loại ựường sucrose, glucose, maltose và BA cho hiệu quả tái sinh chồi tỏi cao hơn so với nuôi cấy trên môi trường MS chỉ bổ sung sucrose.
BA là một loại cytokinin ựược sử dụng khá phổ biến trong nuôi cấy mô, BA có tác dụng kắch thắch sự hình thành chồi, kắch thắch sự nảy mầm của hạt, củ, hoạt hóa sự phân chia tế bào và kéo dài tuổi thọ của cây (Hoàng Minh Tấn, 2005).
Kế thừa những nghiên cứu trên, chúng tôi tiến hành thắ nghiệm với vật liệu là callus thu ựược từ 2 thắ nghiệm trên ựược cắt ựồng ựều ở kắch thước 0,3 Ờ 0,5 cm và nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung các loại ựường saccarose, matose, glucose và BA. Kết quả thắ nghiệm ựược thể hiện ở bảng 4.3.
Kết quả thắ nghiệm cho thấy, tỷ lệ sống của mẫu cấy (ở cả 2 loại callus) tăng khi bổ sung ựường glucose và maltose so với công thức ựối chứng chỉ sử dụng ựường sucrose. điều này cũng phù hợp với những nghiên cứu của Ruby Thapa, 2007, Nguyễn Thị Thanh Phương, 2010 cho thấy khi bổ sung ựường glucose vào môi trường nuôi cấy sẽ làm tăng tỷ lệ sống của mẫu (do mẫu cấy dễ dàng hấp thu và sử dụng ựường glucose hơn so với ựường sucrose và maltose).
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 29
Bảng 4.3. Ảnh hưởng của các loại ựường và chất ựiều tiết sinh trưởng ựến sự tạo chồi từ callus - sau 6 tuần nuôi cấy
Callus thu ựược từ thắ nghiệm bổ sung picloram
Callus thu ựược từ thắ nghiệm bổ sung 2,4D Công thức Tỷ lệ sống (%) Tỷ lệ tạo chồi (%) Chất lượng chồi Tỷ lệ sống (%) Tỷ lệ tạo chồi (%) Chất lượng chồi đC 81,82 66,67 ++ 36,50 100 + CT1 94,12 68,75 + 50,11 20,74 - CT2 100 70,00 ++ 48,21 13,61 - CT3 100 38,46 ++ 49,81 50,00 - CT4 100 66,67 + 50,00 25,20 -
Khi bổ sung BA vào môi trường nuôi cấy, ựối với callus thu ựược trên môi trường bổ sung picloram, cho tỷ lệ mẫu phát sinh chồi và chất lượng chồi khá cao. Chồi ựược tạo thành có kắch thước khá ựồng ựều, màu xanh trắng sức sống và khả năng sinh trưởng, phát triển cao. Công thức 2 là công thức tốt nhất (cho tỷ lệ sống 100%, tạo chồi 70%, chất lượng chồi tốt).
Callus thu ựược trên môi trường bổ sung 2,4D khi nuôi cấy trên môi trường MS1 có bổ sung BA cho hiệu quả tạo chồi không cao (từ 13,61 ựến 50%); chồi tạo thành có màu xanh ựậm, nhiều chồi bị thủy tinh hóa, sức sống và khả năng sinh trưởng kém.
Ghi chú: - đ/C: MS+ 30g/l sucrose - CT1: MS + 15g/l sucrose + 7,5 g/l maltose + 7,5 g/l glucose (MS1) - CT2: MS1 + 0,5 mg/l BA - CT3: MS1 + 1 mg/l BA - CT4: MS1 + 1,5 mg/l BA
- Chất lượng chồi: ++ tốt, + Trung bình, - kém
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 30 Ghi chú: - đ/C: MS+ 30g/l sucrose - CT1: MS + 15g/l sucrose + 7,5 g/l maltose + 7,5 g/l glucose (MS1) - CT2: MS1 + 0,5 mg/l BA - CT3: MS1 + 1 mg/l BA - CT4: MS1 + 1,5 mg/l BA
- Chất lượng chồi: ++ tốt, + Trung bình, - kém
Hình 4.4. Ảnh hưởng của ựường và BA ựến sự phát sinh chồi của callus thu ựược trên môi trường bổ sung picloram
CT2 CT3 CT4
CT1 đC
đC
Hình 4.5. Ảnh hưởng của ựường và BA ựến sự phát sinh chồi của callus thu ựược trên môi trường bổ sung 2,4D
Trường đại Học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp 31
Kết luận: Như vậy callus thu ựược trên môi trường bổ sung picloram cho
hiệu quả tái sinh chồi tốt hơn so với callus thu ựược trên môi trường bổ sung 2,4D. Ở công thức 2 (môi trường MS bổ sung 15g/l sucrose + 7,5 g/l maltose + 7,5 g/l glucose và 0,5 mg/l BA) cho hiệu quả tái sinh chồi tốt nhất. Kết quả này cũng phù hợp với những nghiên cứu của (Novak, F.J. và cộng sự, 1986), Phillip và Luteyn (1983), cho thấy khi nuôi cấy callus cây họ hành tỏi trên môi trường có bổ sung cytokinin cho hiệu quả phát sinh chồi cao.