109 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh được cấy chấm điểm trên môi trường ISP 6 và ISP 7 ở nhiệt độ 300C trong thời gian 10 ngày. Bắt đầu quan sát màu của môi trường sau một ngày cho đến 10 ngày. Nếu kết quả dương tính (+), màu của môi trường sẽ chuyển từ màu vàng nhạt sang màu nâu tối đến màu đen. Kết quả cho thấy, trong 109 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh có 21 chủng (19.27%) có khả năng hình thành sắc tố melanin.
Chương 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. Kết luận
Qua một năm thực hiện đề tài, chúng tôi thu được một số kết quả như sau: 1. Đã phân lập được 109 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh trong 05 loài cây dược liệu tự nhiên ở Việt Nam (Artemisia vulgaris L., Artemisia annua L.,
Plantago asiatic L., Alternanthera sessilis (L.) A. DC., và Desmodium styracifolium
(Osb.) Merr.), với 105 chủng (96,4%) từ rễ, 3 chủng (2,7%) từ lá và 1 chủng (0,9%) từ quả.
2. Đã xác định 109 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh thuộc 5 nhóm màu: Trắng (White) chiếm 51,38%, Xám (Gray) chiếm 38,53%, Nâu (Chromogenes) chiếm 3,67%, Vàng (Yellow) chiếm 3,67% và Xanh (Green) chiếm 2,75%.
3. Đã nghiên cứu đặc điểm hình thái, màu sắc khuẩn lạc trên hệ thống môi trường ISP, khả năng đồng hóa nguồn cacbon, hình thái hiển vi, siêu hiển vi và định loại 109 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh gồm 101 chủng (92,66%) thuộc chi Streptomyces, 7 chủng (6,42%) thuộc chi Actinopolyspora, và 1 chủng 0,92% số chủng thuộc chi Saccharopolyspora.
4. 39,4% số chủng xạ khuẩn nội cộng sinh phân lập được có hoạt tính kháng sinh với ít nhất 1 trong 7 vi sinh vật kiểm định. Số chủng ức chế vi khuẩn Gram âm 15 chủng chiếm 13.76%, Gram dương 42 chủng chiếm 38.53%, nấm men 4 chủng chiếm 3.67% và nấm mốc 10 chủng chiếm 9.17%. Trong đó có 7 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh có hoạt tính kháng sinh tốt với vi khuẩn Gram dương là S1A2, S1A6, S1A7, F1A4.2, SC1A3, SC1A4, và F1A5.1.
4.2. Kiến nghị
Kết quả nghiên cứu cho thấy tiềm năng ứng dụng của xạ khuẩn nội cộng sinh phân lập từ nguồn cây dược liệu là rất lớn. Tuy nhiên, để có một dự liệu hoàn chỉnh về nguồn xạ khuẩn này, cần có những nghiên cứu sâu hơn, vì vậy chúng tôi đề nghị:
1. Định tên đến loài của 7 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh có hoạt tính cao với vi khuẩn Gram dương.
2. Nghiên cứu sâu hơn về hoạt tính kháng sinh, tách chiết, tinh sạch và định tên kháng sinh, kiểm tra các đặc tính lý hoá của chất kháng sinh của 7 chủng xạ khuẩn nội cộng sinh trên.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TIẾNG VIỆT
[1]. Biền Văn Minh (2000), “Nghiên cứu khả năng sinh chất kháng sinh của một số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Bình Trị Thiên”, Luận án TS Sinh học, Hà Nội, tr. 50-96.
[2]. Bùi Thị Hà (2008), “Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh trên cây chè ở Thái Nguyên”, Luận văn Thạc Sĩ Sinh học, Thái Nguyên, tr. 46 - 95.
[3]. Bùi Thị Việt Hà (2006), “Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh thực vật ở Việt Nam”, Luận án TS Sinh học, Hà Nội, tr. 30 - 78. [4]. Đỗ Tất Lợi (2004), “Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam”, Nxb Y học. [5]. Đỗ Thu Hà (2004), “Nghiên cứu xạ khuẩn sinh chất kháng sinh chống
nấm phân lập từ đất Quảng Nam-Đà Nẵng”, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội.
[6]. Dương Minh Lam và Nguyễn Thị Tần. (2013). “Nghiên cứu đặc điểm sinh kháng sinh của chủng xạ khuẩn Streptomyces sp. QN63 chống vi khuẩn nhờn kháng sinh Staphylococcus aureus”. Tạp chí Khoa học và Công nghệ, tr. 34-38, tập 7.
[7]. Lê Gia Hy (1994), “Nghiên cứu xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces sinh chất kháng sinh chống nấm gây bệnh đạo ôn và thối cổ rễ phân lập ở Việt Nam”, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội, tr. 16-78.
[8]. Mai Thị Hằng, Đinh Thị Kim Nhung, Vương Trọng Hào, (2011),
“Thực hành vi sinh vật”, Nxb Đại học Sư Phạm, tr. 95-105.
[9]. Nguyễn Đình Việt (2014), “Nghiên cứu khả năng kháng tế bào ung thư của các chủng xạ khuẩn nội cộng sinh một số cây rừng ngập nặm”, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, ĐHSP Hà Nội, tr. 30 - 50.
[10]. Nguyễn Huỳnh Minh Quyên (2011), “Điều tra, nghiên cứu một số hoạt chất có khả năng kháng vi sinh vật và kháng dòng tế bào ung thư từ xạ khuẩn”, Viện Vi Sinh Vật và Công Nghệ Sinh Học – Đại Học Quốc Gia Hà Nội, tr. 36 - 79.
[11]. Nguyễn Thành Đạt (2011), “Cơ sở sinh học vi sinh vật”, Nxb ĐHSP Hà Nội.
[12]. Phạm Bình Nguyên, Nguyễn Nghĩa Thìn (2002), “Đa dạng sinh học”,
Nxb ĐHQG Hà Nội, tr. 61 – 76.
[13]. Phùng Thị Ngọc Quyền (2014), “Nghiên cứu khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh phân lập từ một số cây rừng ngập mặn”, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, ĐHSP Hà Nội.
[14]. Trung tâm Tài Nguyên và Môi Trường (Trường Đại học Tổng Hợp Hà Nội) (1995), “Tiến tới môi trường bền vững”, Nxb Nông nghiệp Hà Nội. [15]. Từ Minh Koóng (2007), “Kỹ thuật sản xuất dược phẩm”, Nxb Y học.
TIẾNG ANH
[16]. Ahmed M. (2012), “Isolation of microbial endophytes from some ethnomedicinal plants of Jammu and Kashmir”, Cholars research library, 2 (2): 215 – 220.
[17]. Araujo (2002), “Diversity ef endophytic bacteria population and their interaction with Xylella fastidiosa in citrus plants”. Appl Environ Microbiol 68: 4996 – 4914.
[18]. Araujo J.M. (1999), “Isolation of endophytic actinomycetes from roots and leaves of maize (Zea mays L.)”, Brazilian Archives of Biology and Technology, 43: 447 – 451.
[19]. Arawan Shutsrirung (2013), “Diversity of endophytic actinomycetes in mandarin grown in northern Thailand, their phytohormone production potential and plant growth promoting activity”, Soil Science and Plant Nutrition, Volume 59, Issue 3, 322-330.
[20]. Bergey’s Manual Trust, (2012), “Systematic Bacteriology”, Volume Five, University of Georgia, USA.
[21]. Blakrishna G., Shira Shanker A. and Pindi P.K. (2012), “Isolation of phosphate solibulizing actinomycetes from forest soils of Mahabubnagar district”, Appl, Environ. Microbiol.2: 271 – 275.
[22]. Booth C. (1971), Methods in microbiology volume 4, us. Edition published by ACADEMIC PRESSINC, 111 Fifth Avenue, New York 10003. 279 -284. [23]. Cao L. (2004), “Isolation of endophytic actinomycetes from roots and
leaves of banana (Musa acuminata) plants and their activities against
Fusarium oxysporum f. sp. cubense”, World Journal of Microbiology & Biotechnology, 20: 501 – 504.
[24]. Castillo (2002), “Munumbicins, wide - -spectrum antibiotics produced by Streptomyces NRRL 30562, endophytic on Kennedia nigriscans”, Microbiology 148: 2675-2685.
[25]. Castillo (2003), “Kakadumycins, novel antibiotics from Streptomyces
sp. NRRL 30566, an endophyte of Grenvillea pteridifolia”, FEMS Microbiol Lett 234: 183-190.
[26]. Castillo (2006), “Munumbicins E-4 and E – 5; novel broad- spectrumantibiotics from Streptomyces NRRL 3052”, FEMS Microbiol Lett 255: 296-300.
[27]. Coombs JT, Franco (2003), “Isolation and identification of actinobacteria from surface sterilized wheat roots”, Appl, Environ. Microbiol. 69: 5603-5608.
[28]. Coombs JT, Franco (2003), “Visualization of an endophytic Streptomyces
Species in Wheat seed”, Appl, Environ. Microbiol. 69: 4260 – 4262.
[29]. David A. Hopwood (2007), “Streptomyces in nature and medicine”, Oxford University Press.
[30]. Dinesh K. Maheshwari, 2011, “Bacteria in Agrobiology: Plant Growth Respomses”, Springer Berlin Heidelberg, Uttarakhand, India, 824 – 830. [31]. El-Gendy MMA, EL-Bondkly AMA (2010), “Production and genetic
improvement of a novel antimycotic agent, saadamycin, against dermatophytes and other clinical fungi from endophytic Streptomyces
sp. Hedaya 48”, J Ind Microbiol Biotechnol 37 (8): 831 – 841.
[32]. Gangwar M. (2012), “Diversity of endophytic actinomyetes from wheat and its potential as plant growth promoting and biocontrol agents”, Journal of advanced laboratory research in Biology, ISSN 0976 – 7614. [33]. Gangwar M. (2014), “Diversity and biopotential of endophytic
actinomycetes from three medicinal plants in India”, African Journal of Microbiology Rederch, doi: 10.5897/AJMR2012.2452.
[34]. Hema Shenpagam (2012), “isolation of endophytic actinomycetes from medicinal plants and its mutational effect in biocontrol activity”, IJPSR, Vol. 3, Issue 10, 0975-8232.
[35]. HiMedia Laboratories, “Tryptone Glucose Extract Agar”, Technical Date, 1-2. [36]. Hua Hong Chen (2009), “Streptomyces mayteni sp. nov., a novel actinomycete isolated from a Chinese medicinal plant”, Antoni evan Leuwenhoek, 95: 47-53.
[37]. Igarashi Y (2004), “Screening of novel bioactive compounds from plant associated actinomycetes”, Actinomycetologica 18: 63-66.
[38]. Jansto JE, Carter GT (2010), “Biosynthetic potential of phylogentically unique endophytic actinomycetes from tropical plants”, Appl Environ Microbiol 76: 4377-4386.
[39]. Kafur A. Khan AB (2011), “Isolation and screening of endophytic actinomycetes against human bacterial pathogens”, Ecoscan, 1: 173-177.
[40]. Ke Zhao (2010), “The diviversity and antimicrobial activity of endophytic actinomycetes isolated from medicinal plants in Paxi plateau, China”, Curr Microbiol. doi:10.1007/s00284-010-9685-3. [41]. Lee SO (2008), “ Isolation and characterization of endophytic
actinomycetes from Chineses cabbage root as antagonists to
Plasmodiophora brassicae”, J. Microbiol Biotechnol 18: 1741 – 1746. [42]. Liu M. (2013), “Endophytic Streptomyces sp. Y3111 from traditional
Chinese medicine produced antitubercular pluramycins”, Appl Microbiol Biotechnol, doi 10.1007/s00253-013-5335-6.
[43]. Mini P. R (2012), “Endophytic actinomycetes from Indian medicinal plants as antagonists to some phytopathogenic fungi”, Open access, vol 1, issue 4, 1730 – 1736
[44]. Okazaki T (2003), “Studies on actinomycetes isolation from plant leaves In: Kurtboke DI (ed) selective isolation of rare actinomycetes”, Queensland Complete Printing Service, Australia, pp 102 – 121.
[45]. Pullen C (2002), “New and bioactive compounds from Steptomyces
strains residing in the wood of zcelastraceae”, Planta 216: 162-167. [46]. Qin S. (2008), “Glycomyces endophyticus sp. nov., an endophytic
actinomycete isolated from the root of Carex baccans Nees”, International Journal of Systemtic and Evolutionary Microbiology 58, 2525-2528.
[47]. Qin S. (2009), “Isolation, diversity, and antimicrobial activity of rare actinobacteria from medicinal plants of tropical rain forests in Xishuangbanna, China”, App Environ Microbiol 75: 6176-6186.
[48]. Qin S. (2011), “Biodiversity, bioactive natural products and biotechnological potential of plant – associated endophytic actinobacteria”, App Microbiol Biotechnol 89: 457 – 473.
[49]. Qin S. (2012), “Nocardioides panzhihuaensis sp. nov., a novel endophytic actinomycete isolated from medicinal plant Jatropha curcas L.”, Antoni evan Leuwenhoek, doi. 10. 1007/s10482-012-9745-8.
[50]. Qin S. (2012), “Promicromonospora xylanilytica sp. nov., an endophytic actinomycete isolated from surface – sterilized leaves of the medicinal plant Maytenus austroyunnanensis”, International Journal of Systemtic and Evolutionary Microbiology 62, 84 – 89.
[51]. Rungin S. (2012), “Plant growth enhancing effects by a siderophore – producing endophytic Streptomycetes isolated from a Thai jasmne rice plant (Oryza sativa L. cv. KDML105)”, Antonie van Leeuwenhoek, 102: 463 – 472.
[52]. Sessitsch (2004), “Endophytic bacterial communities of field – grown potato plants and their plant – growth promoting and antagonistic abilities”, Can J Microbiol 50: 239 – 249.
[53]. Shirling E – B. Gottlieb D. (1966), “Methods for characterization of
Streptomyces species”, International Journal of systematic bacteriology, 3 (16): 313 – 340.
[54]. Strobel GA, Daisy B (2003), “Bioporospecting for microbial endophytes and their natural products”, Microbiol, Mol. Biol. Rev. 67: 491-302.
[55]. Surette (2003), “Bacterial endophytes in processing carrots (Daucus carota L. var. sativus): their localization, population density, biodiversity and their effects on plant growth”, Plant Soil 253: 381 –390.
[56]. Takahashi Y, Omura S (2003), “Isolation of new actinomycete strains for the screening of new bioactive compounds”, Journal of General and Applied Microbioogy 49: 141 – 154.
[57]. Tan HM (2006), “Isolation of endophytic actinomycetes from different cultivars of tomato and their activities against Ralstonia solanacearum
in vitro”, World J Microbiol Biotechnol 22: 1275 – 1280.
[58]. Teachowisan, John F. Peberdy (2003), “Isolation of endophytic actinomyctes from selected plants and their antifungal activity”, World Journal of Mcrobiology – Biotechnology, 19: 381 – 385.
[59]. Teachowisan, T., Wanbajob, A. (2006), “Identification os Streptomyces
sp. Tc022, an endophytic in Alpinia galangal, and the isolation os actinomycin D”, Ann Microbiol 56 (2): 113- 211.
[60]. Tian (2007), “Diversity of Cultivated and Uncultivated actinobacterial endophytes in the stems and root of rice”, Microbial ecology, 53: 700 – 707. [61]. Velazquez (2008), “Genetic diversity of endophytic bacteria which
could be find in the apoplastic sap of medullary parenchym of the stem of healthy sugarcane plant”, J Basic Microbiol 48: 118 – 124.
[62]. Verma (2009), “Endophytic actinomycetes from Azadirachta indica A. Juss: isolation, diversity, and anti-microbial activity”, Microb Ecol 57: 749-756. [63]. Waksman, S.A. (1961), The Actinomycetes, Classification,
identification and description of genera and species, Baltimore, Williams & Wilkins, vol 2, 1741 – 1746
[64]. Yuan (2008), “Genetic characterization of endophytic actinobacteria isolated from the medicinal plants in Sichuan”, Ann Microbiol 58 (4): 597 – 604. [65]. Zhang X. (2012), “Sreening and Preliminary Identificaltion of
Medicinal Plants Endophytic Actinomycetes Used for Inhibiting Penicillin – Resistant Staphylococcus aureus”, International Journal of Biology, 4 (2): 119 – 124.
[66]. Zhao (2010), “Pseudonocardia artemisiae sp. nov., a novel actinobacterium isolated from surface – sterilized Artemisia annua L.” Int J Syst Evol Microbiol. doi: 10.1099/ijs.0.021931-0.
[67]. Zhao (2010), “Streptomyses artemisiae sp. nov., a novel actinobacterium isolated from surface – sterilized Artemisia annua L.” Int J Syst Evol Microbiol. 60: 27-32.
[68]. Zhao (2010), “The diversity and antimicrobial activity of endophytic actinomycetes isolated from medicinal plants in Paxi plateau, China” Curr Microbiol. doi: 10.1007/s00284-010-9685-3.
[69]. Zhi XY (2009), “An update of the structure and 16S rRNA gene sequence – based definition of higher ranks of the class Actinobacteria, with the proposal of two new suborder and four new – families and emended descriptions of the existing higher taxa” International Journal of Systematic Bacteriology, 59: 589 – 608.
[70]. Zhu (2009), “” Selective isolation and ansamycin – Targeted screeings of coomensal actinomycetes from the “Maytansinoids - Producing” arboreal Trewiamudi jlora, Curr Microbiol; 58: 87 – 94.
[71]. Zin (2007), “Bioactive endophytic Streptomycetes from the Malay Pininsula”, FEMS Microbiol Lett 274: 83 – 88.
WEB
[72]. http://chinhphu.vn/portal/page/portal/chinhphu/NuocCHXHCNVietNa m/ThongTinTongHop/dialy
[73]. http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir