* Định nghĩa chỉ số phá huyết (CSPH)
Chỉ số phá huyết là số ml dung dịch đệm cần thiết để hoà tan saponin có trong 1 gam nguyên liệu (dược liệu, bột saponin) để gây ra hiện tượng phá huyết đầu tiên và hoàn toàn đối với một loại máu đã chọn, tiến hành trong điều kiện quy định.
* Tiến hành:
Chuẩn bị các dung dịch cần thiết:
a) Dung dịch đệm: Dung dịch đệm phosphat PH 6,8 (TT) b) Dung dịch máu thỏ 0,2% đã loại fibrin
Cho vào bình định mức dung tích 50ml, 20ml dung dịch đệm, thêm chính xác 1,0ml dung dịch máu thỏ đã loại fibrin. Lắc nhẹ. Thêm dung dịch đệm vừa đủ 50ml (dd A).
Cho vào bình định mức dung tích 50ml, 20ml dung dịch đệm, thêm chính xác 5ml dung dịch A. Lắc nhẹ. Thêm dung dịch đệm vừa đủ 50ml.
Chuẩn bị dung dịch thử:
Pha dung dịch dược liệu Ngấy hương 10%
Cân chính xác 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml. Cho thêm 50ml dung dịch đệm vừa đun sôi. Lắc đều cho tan. Lọc nóng qua bông vào trong cốc có mỏ. Để nguội. Chuyển dung dịch vào trong bình định mức 50,0ml. Tráng
bình nón bằng dung dịch đệm và lọc qua lớp bông đã sử dụng. Thêm dung dịch đệm đến đủ 50,0ml. Lắc đều.
Lấy 20 ống nghiệm nhỏ (5ml), đánh số thứ tự từ 1 đến 20 và cho vào mỗi ống lần lượt các dung dịch theo bảng sau:
Bảng 3. Tiến hành xác định chỉ số phá huyết STT DD đệm (ml) DD thử 5% với ddB, 15% với ddC (ml) DD máu bò 0,2% đã loại fibrin (ml) 1 0,95 0,05 1 2 0,90 0,10 1 3 0,85 0,15 1 4 0,80 0,20 1 5 0,75 0,25 1 6 0,70 0,30 1 7 0,65 0,35 1 8 0,60 0,40 1 9 0,55 0,45 1 10 0,50 0,50 1 11 0,45 0,55 1 12 0,40 0,60 1 13 0,35 0,65 1 14 0,30 0,70 1 15 0,25 0,75 1 16 0,20 0,80 1 17 0,15 0,85 1 18 0,10 0,90 1 19 0,05 0,95 1 20 0,00 1,00 1
Trộn đều dung dịch bằng cách bịt đầu ống nghiệm bằng ngón tay cái và dốc ngược dung dịch một cách nhẹ nhàng (làm tất cả với 20 ống nghiệm). Để yên 2 giờ.
Quan sát hiện tượng phá huyết:
Các ống nghiệm từ 1 - 20 sẽ có màu từ hồng nhạt đến hồng. Những ống có màu hồng, trong suốt, đáy ống không có tủa là có sự phá huyết hoàn toàn. Những ống còn hồng cầu ở đáy, lắc lên thấy đục là chưa được phá huyết hoàn toàn. Xác định ống gây ra sự phá huyết đầu tiên và hoàn toàn (là ống có màu hồng trong suốt nhưng ống trước đó vẫn còn hồng cầu lắng tủa).
* Kết quả: Xác định ống 16 gây ra sự phá huyết đầu tiên và hoàn toàn. Chỉ số phá huyết được tính theo công thức sau:
C: nồng độ của dung dịch thử
X: là số ml dung dịch thử đã cho vào ống nghiệm mà ở ống đó có sự phá huyết đầu tiên và hoàn toàn
CSPH của dược liệu Ngấy hương là: 25